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科研检测交流
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[交流]
【实验干货】生物超薄切片+HRTEM:线粒体嵴原子像一步到位
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【取材】 心肌1 mm³,3 %戊二醛-0.1 m二甲胂酸钠4 ℃过夜,防冰晶;pbs洗3×10 min,去游离醛。 【后固定】 1 % oso4 4 ℃ 1 h,导电+反差;梯度丙酮30-50-70-90-100 %各10 min,彻底脱水。 【包埋】 epon 812梯度渗透2 h,纯树脂过夜;60 ℃聚合48 h,硬度适中,切片不颤。 【切片】 钻石刀45°,70 nm银白光,200目铜网捞片;2 %醋酸铀酰-柠檬酸铅各5 min,双染色增衬。 【hrtem】 tf-20 200 kv,低剂量<100 e⁻ Å⁻²,spot 9,c s≈0,像素0.05 nm;线粒体嵴0.22 nm晶格可见,无辐照皱缩。 【心得】 铍台plasma 30 s除烃;干燥剂保存<24 h上机,防吸水变形;autoctf自动校正像散,30 min拿原子级gif,导师群秒赞! |
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