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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于考马斯亮蓝法测定蛋白含量的问题
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heqin-1985

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于考马斯亮蓝法测定蛋白含量的问题 已有12人参与

我今天用考马斯亮蓝法测定蛋白含量时发现我的蛋白和考马斯亮蓝试剂作用后的蓝色物质在测吸光时不同时间时测得的值不同，而且一直在降低，请问这是怎么回事啊？现象正常吗？还有pH的差异会影响考马斯亮蓝法测定的结果吗？请教大家~~谢谢~~
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1楼 2010-01-26 13:51:51
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

poog502

木虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by qrf0704 at 2010-01-27 12:55:09:
等稳定5分钟后再测定

如果是考马斯亮蓝纯度较低的话（一般国产的低，进口的纯度高可直接使用），配置的溶液还要过滤后使用。
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6楼2010-04-23 10:31:20
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植物教主

铁杆木虫 (著名写手)
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引用回帖:
Originally posted by catherine_ at 2010-01-26 15:48:31:
你观察到的结果是正确的，确实一直在降低。
pH的影响是巨大的，不过你肯定要做空白对照的呀，那背景不就消除了吗？

那如果我想知道pH对某浸出液的蛋白含量的影响，我用酸碱调了从2-12的6个pH值，是否我的空白也要用水代替浸出液，然后调到对应的pH呢?
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哦也也哦啦啦~
10楼2010-10-14 20:47:18
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wyswu

铜虫 (小有名气)
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17楼: Originally posted by 田俊杰16 at 2013-04-20 09:11:02
我想请教一下为什么我用考马斯亮蓝G-250测可溶性蛋白时，做的标曲一个9都达不到啊

有同感，看了这么多帖子，我觉得这个方法还需要再摸索一下，看能不能有所提升
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18楼2013-11-17 20:12:59
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catherine_

木虫 (正式写手)
★
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你观察到的结果是正确的，确实一直在降低。
pH的影响是巨大的，不过你肯定要做空白对照的呀，那背景不就消除了吗？
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2楼2010-01-26 15:48:31
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zmchail

金虫 (小有名气)

答复

★
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PH在正常范围内是不影响考染的，只有强的还原物质如DDT  CHAPS 等影响，一般染色剂与蛋白质在5分钟内达到稳定！参考1976年的一篇英文文献吧！
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3楼2010-01-27 12:19:09
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qrf0704

铁虫 (小有名气)
等稳定5分钟后再测定
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4楼2010-01-27 12:55:09
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xiaomi1208

金虫 (正式写手)
★
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做空白对照  还要蒸馏水调零
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5楼2010-04-22 22:04:31
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moonblue789

金虫 (小有名气)
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lstt09nk(金币+1):欢迎新朋友~~ 2010-04-23 12:53
蛋白浓度不要太高，有效OD在0.1-0.5左右，太高会溶液会有蓝色沉淀物
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7楼2010-04-23 11:45:41
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Rubisco580

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by poog502 at 2010-04-23 10:31:20:


如果是考马斯亮蓝纯度较低的话（一般国产的低，进口的纯度高可直接使用），配置的溶液还要过滤后使用。

没错。我们用的都是1#滤纸过滤的，而且中途不换滤纸的话堵的很厉害。
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8楼2010-04-23 14:03:33
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gn2003_0

金虫 (小有名气)
★
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这个现象是很普遍的，个人感觉一来蛋白和考马斯亮蓝结合有沉淀过程。配制考马斯亮蓝时一定记得过滤、放置几天再使用，使用时取上清。
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9楼2010-04-23 14:36:06
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