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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于考马斯亮蓝法测定蛋白含量的问题
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heqin-1985

银虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于考马斯亮蓝法测定蛋白含量的问题 已有12人参与

我今天用考马斯亮蓝法测定蛋白含量时发现我的蛋白和考马斯亮蓝试剂作用后的蓝色物质在测吸光时不同时间时测得的值不同，而且一直在降低，请问这是怎么回事啊？现象正常吗？还有pH的差异会影响考马斯亮蓝法测定的结果吗？请教大家~~谢谢~~
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1楼 2010-01-26 13:51:51
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gn2003_0

金虫 (小有名气)
★
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这个现象是很普遍的，个人感觉一来蛋白和考马斯亮蓝结合有沉淀过程。配制考马斯亮蓝时一定记得过滤、放置几天再使用，使用时取上清。
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9楼2010-04-23 14:36:06
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catherine_

木虫 (正式写手)
★
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你观察到的结果是正确的，确实一直在降低。
pH的影响是巨大的，不过你肯定要做空白对照的呀，那背景不就消除了吗？
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2楼2010-01-26 15:48:31
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zmchail

金虫 (小有名气)

答复

★
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PH在正常范围内是不影响考染的，只有强的还原物质如DDT  CHAPS 等影响，一般染色剂与蛋白质在5分钟内达到稳定！参考1976年的一篇英文文献吧！
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3楼2010-01-27 12:19:09
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qrf0704

铁虫 (小有名气)
等稳定5分钟后再测定
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4楼2010-01-27 12:55:09
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