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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 蛋白表达分子量偏大
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田甜思

新虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白表达分子量偏大 已有1人参与

最近在做重组蛋白表达，表达之后也有目的条带，但是就是分子量比理论值要偏大。我的质粒是经过测序的，没有碱基的缺失和突变。另外，我做的是SDS-PAGE.偏大5-50都不等，各位大师帮帮忙，解决下...  着急啊！！！
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1楼 2013-03-12 20:26:46
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
SDS-PAGE确定的分子量不是很准确的，有些蛋白的疏水性强，等电点高，在胶上跑得慢也不足为奇。只要确定表达的蛋白正确就可以了。
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2楼2013-03-13 00:21:10
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linxt2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有些偏大很常见的，可以通过表达测试时设置阴性对照来初步确认。
进一步确认可以通过活性检测。
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小兵一个
3楼2013-03-13 13:13:03
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田甜思

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-03-13 00:21:10
SDS-PAGE确定的分子量不是很准确的，有些蛋白的疏水性强，等电点高，在胶上跑得慢也不足为奇。只要确定表达的蛋白正确就可以了。

哦 谢谢
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4楼2013-03-13 16:36:40
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田甜思

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by linxt2005 at 2013-03-13 13:13:03
有些偏大很常见的，可以通过表达测试时设置阴性对照来初步确认。
进一步确认可以通过活性检测。

对照是有的 就是表达的目的蛋白偏大
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5楼2013-03-13 16:37:17
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Phyrce

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-10 13:13:55
楼主你倒是说说目标蛋白的大小啊。 目标蛋白5KD偏大5KD ，跟目标蛋白50KD偏大5KD，那不是一个概念啊。
SDS-PAGE是不太准确，不过50KD的话，就太夸张了吧- -
而且SDS-PAGE根据的就是蛋白分子量大小，蛋白被负电荷包裹主要受电场力作用迁移，跟等电点疏水什么的关系不大啊。
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6楼2013-03-13 17:29:13
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
6楼: Originally posted by Phyrce at 2013-03-13 17:29:13
楼主你倒是说说目标蛋白的大小啊。 目标蛋白5KD偏大5KD ，跟目标蛋白50KD偏大5KD，那不是一个概念啊。
SDS-PAGE是不太准确，不过50KD的话，就太夸张了吧- -
而且SDS-PAGE根据的就是蛋白分子量大小，蛋白被负电荷包 ...

SDS-PAGE虽然把变性变性并且由于蛋白表面结合了SDS而带负电荷，但是实际上疏水性强的蛋白变性不完全，所以不会是标准的球形。等电点高的蛋白即使结合了SDS，所带的电性也比较少，所以它们在胶上移动比较慢。
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7楼2013-03-14 05:17:05
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jackhua17

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
8楼2013-03-14 10:32:30
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田甜思

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by Phyrce at 2013-03-13 17:29:13
楼主你倒是说说目标蛋白的大小啊。 目标蛋白5KD偏大5KD ，跟目标蛋白50KD偏大5KD，那不是一个概念啊。
SDS-PAGE是不太准确，不过50KD的话，就太夸张了吧- -
而且SDS-PAGE根据的就是蛋白分子量大小，蛋白被负电荷包 ...

是这样的，我的理论值是70KD,但是在脚上的为止已经有120KD了，还有一个样品的理论值是37KD，胶上就是四十多了，还有请教一下蛋白序列的亲疏水性怎么判别呢
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9楼2013-03-14 15:37:17
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田甜思

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by jackhua17 at 2013-03-14 10:32:30
为什么你们表达蛋白都不用MS确认一下精确的分子量呢？

MS 是什么？
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10楼2013-03-14 15:47:24
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