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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】有人用过毕赤酵母GS115吗？
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worm2010

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】有人用过毕赤酵母GS115吗？

请问有人用过毕赤酵母GS115吗？重组质粒转入后，在MM和MD培养基上鉴定，是不是都可以长出菌落来呀？
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1楼 2010-12-22 15:12:22
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susizheng

木虫 (著名写手)
★ ★
worm2010(金币+1): 2010-12-22 17:11:44
dhd997(金币+2):good 2010-12-23 08:40:39
引用回帖:
Originally posted by worm2010 at 2010-12-22 15:48:39:

不好意思呀，我没太明白呢，我想问：
1，pPICZαA转入GS115之后用什么培养基筛选呢？
2，培养基加不加组氨酸？（我觉得不加组氨酸的话GS115无论是否转入了重组质粒都不会生长）

不好意思，可能我没解释清楚，组氨酸筛选只适合带有His4的表达载体同你的组氨酸缺陷型菌株配套的表达系统。你用的质粒pPICZαA没有His4,因此组氨酸筛选不适合，因此只能用抗性筛选。培养基就没必要用MM/MMH或者MD/MDH了，用YPD+Zeocin抗生素就可以了。
PS：你可能看的是pPIC9K和pPIC3.5K的那个表达系统，根据你的质粒找手册。
这个才是pPICZαA操作手册。
http://g.zhubajie.com/Aurllink.php?id=10440589sfwsj5xfljf2msjw
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7楼2010-12-22 16:04:02
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susizheng

木虫 (著名写手)
worm2010(金币+1): 2010-12-22 15:34:46
是的。
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2楼2010-12-22 15:25:29
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worm2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-12-22 15:25:29:
是的。

我如果用pPICZαA质粒转的话，需不需要在培养基中加组氨酸啊？另外，如果两种培养基中都张菌的话，那是不是就可以只用MDH或MMH进行筛选呢？
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3楼2010-12-22 15:31:17
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susizheng

木虫 (著名写手)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流 2010-12-23 08:40:26
pPICZαA上面没有His4，不能用组氨酸筛选，只能用zeocin筛选了。
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4楼2010-12-22 15:36:42
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susizheng

木虫 (著名写手)
引用回帖:
Originally posted by worm2010 at 2010-12-22 15:31:17:

我如果用pPICZαA质粒转的话，需不需要在培养基中加组氨酸啊？另外，如果两种培养基中都张菌的话，那是不是就可以只用MDH或MMH进行筛选呢？

pPICZαA上面没有His4，不能用组氨酸筛选，只能用zeocin筛选了。
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5楼2010-12-22 15:37:15
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worm2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-12-22 15:37:15:

pPICZαA上面没有His4，不能用组氨酸筛选，只能用zeocin筛选了。

不好意思呀，我没太明白呢，我想问：
1，pPICZαA转入GS115之后用什么培养基筛选呢？
2，培养基加不加组氨酸？（我觉得不加组氨酸的话GS115无论是否转入了重组质粒都不会生长）
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6楼2010-12-22 15:48:39
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worm2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by susizheng at 2010-12-22 16:04:02:

不好意思，可能我没解释清楚，组氨酸筛选只适合带有His4的表达载体同你的组氨酸缺陷型菌株配套的表达系统。你用的质粒pPICZαA没有His4,因此组氨酸筛选不适合，因此只能用抗性筛选。培养基就没必要用MM/MMH或者 ...

非常感谢！我明白了
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8楼2010-12-22 17:12:04
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yuyan225

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
我也即将用GS115做，质粒也是pICZA，但该质粒没有信号肽，不知道楼主如何解决该问题~~
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9楼2010-12-22 17:39:31
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worm2010

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by yuyan225 at 2010-12-22 17:39:31:
我也即将用GS115做，质粒也是pICZA，但该质粒没有信号肽，不知道楼主如何解决该问题~~

我表达的蛋白是带有信号肽序列的，而且用的是pPICZα系列这个质粒本身就有信号肽呀，只要读码框不错就可以了
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10楼2010-12-22 18:09:34
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yuyan225

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
序列本身带有信号肽也不一定能带到胞外分泌哦 ，如果我没记错的话pPICZA是没有信号的吧
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11楼2010-12-23 08:30:26
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awvc

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
可以试试用pPIC9K 质粒转化GS115,那个是带有信号肽的可以直接胞外分泌 筛选方法一样

[ Last edited by awvc on 2010-12-27 at 19:22 ]
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12楼2010-12-27 19:09:21
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halfbeer

捐助贵宾 (小有名气)
★
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引用回帖:
9楼: Originally posted by yuyan225 at 2010-12-22 17:39:31
我也即将用GS115做，质粒也是pICZA，但该质粒没有信号肽，不知道楼主如何解决该问题~~

一定要用picza吗   ppic9k就有信号肽啊
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13楼2015-07-06 15:45:38
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momodn

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
都可以长得，但是得看转化后的表型了，Mut+在MD上长得快，在MM上长得慢，Muts的在两种平板上长得一样快
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14楼2015-07-14 14:38:49
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Dearstar

新虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by yuyan225 at 2010-12-23 08:30:26
序列本身带有信号肽也不一定能带到胞外分泌哦 ，如果我没记错的话pPICZA是没有信号的吧

有信号肽呀。
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15楼2015-10-12 14:53:52
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632362481

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
ppiczaABC系列用博来霉素的，9K的话用MD筛选，另外MM和MD培养基是用来鉴别甲醇利用正常型还是缓慢型的。
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16楼2015-12-19 13:54:14
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