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todd999

木虫 (正式写手)


[交流] 毕赤酵母将目的蛋白分泌到胞外,在30度下不会失活吗?酿酒酵母胞内表达会糖基化吗?

蛋白不是一般4度保存,高温不是容易变性吗?酿酒酵母胞内表达会糖基化吗?
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todd999

木虫 (正式写手)


引用回帖:
10楼: Originally posted by anyaxiong at 2014-01-08 08:21:11
如果研究未知蛋白的话,建议表达在比较低的温度,纯化在4℃进行;酿酒酵母表达蛋白的糖基化要看蛋白的序列可以预测,但是不一定跟实际情况完全一致。另外你说的不清楚,不是所有的蛋白都在4℃保存,一般用buffer溶解 ...

1.我指的4度是短时间保存,但毕赤酵母的表达在30度,而且时间较长,如果蛋白分泌到胞外,不会变性吗

2.酿酒酵母不分泌到胞外,胞内表达也会糖基化?毕赤酵母好像胞内表达不会糖基化。
13楼2014-01-08 14:12:36
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)


★ ★
todd999(金币+1): 谢谢参与
gyesang: 金币+1, 鼓励交流! 2014-01-08 19:06:42
引用回帖:
13楼: Originally posted by todd999 at 2014-01-08 14:12:36
1.我指的4度是短时间保存,但毕赤酵母的表达在30度,而且时间较长,如果蛋白分泌到胞外,不会变性吗

2.酿酒酵母不分泌到胞外,胞内表达也会糖基化?毕赤酵母好像胞内表达不会糖基化。...

1.毕赤酵母表达外源蛋白一般在28℃进行,30℃是为了实现宿主的的原始积累,然后诱导表达,如果目的蛋白热不稳定,可以尝试将表达温度适当调低
2.第二点我也不怎么确定
14楼2014-01-08 16:53:20
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Allen206

银虫 (小有名气)



todd999(金币+1): 谢谢参与
你的体温是多少度?体内蛋白变性没?酵母是真喝,有修饰包括糖基化
15楼2014-01-08 17:29:37
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)


★ ★ ★ ★ ★
todd999(金币+1): 谢谢参与
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-08 08:50:04
todd999: 金币+1 2014-01-08 14:10:44
如果研究未知蛋白的话,建议表达在比较低的温度,纯化在4℃进行;酿酒酵母表达蛋白的糖基化要看蛋白的序列可以预测,但是不一定跟实际情况完全一致。另外你说的不清楚,不是所有的蛋白都在4℃保存,一般用buffer溶解的蛋白短期内会用到的话放在4℃几天是可以的,时间长了就会出现不可控的情况;长期保存的话都是在-80℃。
10楼2014-01-08 08:21:11
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todd999

木虫 (正式写手)


引用回帖:
14楼: Originally posted by anyaxiong at 2014-01-08 16:53:20
1.毕赤酵母表达外源蛋白一般在28℃进行,30℃是为了实现宿主的的原始积累,然后诱导表达,如果目的蛋白热不稳定,可以尝试将表达温度适当调低
2.第二点我也不怎么确定...

也就是说如果蛋白对温度敏感,就只能胞内表达无法分泌表达了是吗?
16楼2014-01-09 10:41:26
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todd999

木虫 (正式写手)


引用回帖:
15楼: Originally posted by Allen206 at 2014-01-08 17:29:37
你的体温是多少度?体内蛋白变性没?酵母是真喝,有修饰包括糖基化

您说的是胞内表达吧?我指的是分泌表达蛋白到培养基中的情况。
17楼2014-01-09 11:33:16
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anyaxiong

铁杆木虫 (知名作家)


引用回帖:
16楼: Originally posted by todd999 at 2014-01-09 10:41:26
也就是说如果蛋白对温度敏感,就只能胞内表达无法分泌表达了是吗?...

可以啊,适当的缩短诱导时间,比如诱导两天就结束
18楼2014-01-09 16:44:25
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haixiawu2楼
2014-01-08 01:30   回复  
todd999(金币+1): 谢谢参与
2014-01-08 02:57   回复  
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yaoyao1454楼
2014-01-08 03:51   回复  
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yaoyao1455楼
2014-01-08 03:51   回复  
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namezheli6楼
2014-01-08 07:32   回复  
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userhung8楼
2014-01-08 07:36   回复  
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userhung9楼
2014-01-08 07:36   回复  
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zhoupeng8711楼
2014-01-08 08:24   回复  
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zhoupeng8712楼
2014-01-08 08:24   回复  
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夏至199019楼
2014-04-26 17:32   回复  
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