[交流] 毕赤酵母将目的蛋白分泌到胞外，在30度下不会失活吗？酿酒酵母胞内表达会糖基化吗？

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1楼2014-01-08 00:50:01

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todd999

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10楼: Originally posted by anyaxiong at 2014-01-08 08:21:11
如果研究未知蛋白的话，建议表达在比较低的温度，纯化在4℃进行；酿酒酵母表达蛋白的糖基化要看蛋白的序列可以预测，但是不一定跟实际情况完全一致。另外你说的不清楚，不是所有的蛋白都在4℃保存，一般用buffer溶解 ...

1.我指的4度是短时间保存，但毕赤酵母的表达在30度，而且时间较长，如果蛋白分泌到胞外，不会变性吗

2.酿酒酵母不分泌到胞外，胞内表达也会糖基化？毕赤酵母好像胞内表达不会糖基化。

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13楼2014-01-08 14:12:36

anyaxiong

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gyesang: 金币+1, 鼓励交流！ 2014-01-08 19:06:42

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13楼: Originally posted by todd999 at 2014-01-08 14:12:36
1.我指的4度是短时间保存，但毕赤酵母的表达在30度，而且时间较长，如果蛋白分泌到胞外，不会变性吗

2.酿酒酵母不分泌到胞外，胞内表达也会糖基化？毕赤酵母好像胞内表达不会糖基化。...

1.毕赤酵母表达外源蛋白一般在28℃进行，30℃是为了实现宿主的的原始积累，然后诱导表达，如果目的蛋白热不稳定，可以尝试将表达温度适当调低
2.第二点我也不怎么确定

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14楼2014-01-08 16:53:20

Allen206

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你的体温是多少度？体内蛋白变性没？酵母是真喝，有修饰包括糖基化

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15楼2014-01-08 17:29:37

anyaxiong

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kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2014-01-08 08:50:04
todd999: 金币+1 2014-01-08 14:10:44

如果研究未知蛋白的话，建议表达在比较低的温度，纯化在4℃进行；酿酒酵母表达蛋白的糖基化要看蛋白的序列可以预测，但是不一定跟实际情况完全一致。另外你说的不清楚，不是所有的蛋白都在4℃保存，一般用buffer溶解的蛋白短期内会用到的话放在4℃几天是可以的，时间长了就会出现不可控的情况；长期保存的话都是在-80℃。

10楼2014-01-08 08:21:11

todd999

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14楼: Originally posted by anyaxiong at 2014-01-08 16:53:20
1.毕赤酵母表达外源蛋白一般在28℃进行，30℃是为了实现宿主的的原始积累，然后诱导表达，如果目的蛋白热不稳定，可以尝试将表达温度适当调低
2.第二点我也不怎么确定...

也就是说如果蛋白对温度敏感，就只能胞内表达无法分泌表达了是吗？

16楼2014-01-09 10:41:26

todd999

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15楼: Originally posted by Allen206 at 2014-01-08 17:29:37
你的体温是多少度？体内蛋白变性没？酵母是真喝，有修饰包括糖基化

您说的是胞内表达吧？我指的是分泌表达蛋白到培养基中的情况。

17楼2014-01-09 11:33:16

anyaxiong

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16楼: Originally posted by todd999 at 2014-01-09 10:41:26
也就是说如果蛋白对温度敏感，就只能胞内表达无法分泌表达了是吗？...

可以啊，适当的缩短诱导时间，比如诱导两天就结束

18楼2014-01-09 16:44:25