应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 毕赤酵母表达重组蛋白遇到大难题
211/3返回列表123下一页
查看: 3281  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

邱玉信

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2014-08-31 19:08:00
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

bio_sci

捐助贵宾 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
可以用western验证一下

[ 发自小木虫客户端 ]
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2014-09-01 06:54:47
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
★ ★ ★
邱玉信(西门吹雪170代发): 金币+3, 鼓励回帖交流 2014-09-01 19:23:41
第一步、转化后营养缺陷筛选（注意不要污染）；第二步，菌落PCR验证转进去（可省略）；第三步，抗生素梯度筛选高拷贝转化子（一般1.5mg G418浓度获得高表达的机率比较高）；第四步，甲醇诱导筛选高表达转化子。如果前边没有好好的做，想省劲儿，获得成功的可能性不是很大呀。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2014-09-01 17:37:04
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

miclebibi

银虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by 邱玉信 at 2014-09-01 22:08:56
你好，如果做westen我想问下怎样设计相关重组蛋白的抗体呢？...

抗体的选择可以上NCBI检索Protein中你的目的蛋白，右侧有一个抗体的链接（连到http://www.labome.com）上面有该抗体哪些公司有，你的蛋白应该很好找的
赞一下(1人) 回复此楼
14楼2014-09-02 12:04:56
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)
★ ★
邱玉信(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-01 19:23:04
(1)外源蛋白在毕赤酵母中不能得到表达也是常见的。可以通过优化基因序列，启动子以及分泌信号等来尝试解决一下，但不要抱太大期望。
（2）如果你的蛋白有糖基化位点的话分子量可能会增加。
赞一下 回复此楼
2楼2014-08-31 21:47:00
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

邱玉信

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
3楼2014-08-31 22:17:22
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhaocy8903

木虫 (知名作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 邱玉信 at 2014-08-31 22:17:22
首先谢谢你！我没有说我的外源蛋白没有表达，我的意思是说就算外源蛋白表达了，用上面这两种方法也很难验证，想请教一下还有其它的方法不？...

从电泳结果看，至少可以说没有明显的表达条带。即使有微量的表达，以后的纯化也很难做的。
赞一下 回复此楼
4楼2014-08-31 22:26:21
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

miclebibi

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
邱玉信(西门吹雪170代发): 金币+2, 鼓励回帖交流 2014-09-01 19:23:25
这种情况必须用westen验证了，从的sds-page看不出什么区别，设计你重组蛋白的抗体，做一下westen就行，不知道你的重组策略，如果有标签什么的还是可以纯化的
赞一下 回复此楼
6楼2014-09-01 09:01:44
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dongge2013

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
类似的表达我也做过，就做到这一步，蒙混过关，勉强毕业了
赞一下 回复此楼
7楼2014-09-01 16:23:28
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

邱玉信

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
9楼2014-09-01 22:05:59
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

邱玉信

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
10楼2014-09-01 22:08:56
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 邱玉信 的主题更新
211/3返回列表123下一页
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 344求调剂 +3 knight344 2026-03-16 3/150 2026-03-16 09:42 by 无际的草原
[考研] 0703化学调剂 290分有科研经历，论文在投 +6 腻腻gk 2026-03-14 6/300 2026-03-16 09:39 by 闲人终南山
[考研] 288求调剂 +4 奇点0314 2026-03-14 4/200 2026-03-14 23:04 by JourneyLucky
[考研] 材料工程327求调剂 +3 xiaohe12w 2026-03-11 3/150 2026-03-14 20:20 by ms629
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +5 SUICHILD 2026-03-12 5/250 2026-03-14 14:53 by jean5056
[考研] 求调剂 +5 鹤遨予卿 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:44 by JourneyLucky
[考研] 293求调剂 +5 上班不着吉 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:37 by JourneyLucky
[考研] 0703求调剂 +7 jtyq001 2026-03-10 7/350 2026-03-14 01:06 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂 +3 CUcat 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:25 by JourneyLucky
[考研] 318求调剂 +3 李新光 2026-03-10 3/150 2026-03-14 00:21 by JourneyLucky
[考研] 279求调剂 +3 抓着星星的女孩 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:47 by userper
[考研] 求调剂 +7 18880831720 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:10 by JourneyLucky
[考研] 工科调剂 +4 Jiang191123！ 2026-03-11 4/200 2026-03-13 15:15 by Miko19
[考研] 材料301分求调剂 +5 Liyouyumairs 2026-03-12 5/250 2026-03-13 14:42 by JourneyLucky
[考研] 0856化学工程280分求调剂 +4 shenzxsn 2026-03-11 4/200 2026-03-13 11:55 by ymwdoctor
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +4 薛云鹏 2026-03-13 4/200 2026-03-13 10:40 by 学员8dgXkO
[考研] 290求调剂 +3 ADT 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:19 by peike
[考研] 085602化工求调剂 +7 董boxing 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:07 by BruceLiu320
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭