应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 高拷贝毕赤酵母表达出来的蛋白也是多拷贝的嘛还是自动酶切变成单体蛋白了
71/1返回列表
查看: 1243  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

475502411

铜虫 (著名写手)

[求助] 高拷贝毕赤酵母表达出来的蛋白也是多拷贝的嘛还是自动酶切变成单体蛋白了

大家好，我想请教一下，高拷贝毕赤酵母表达出来的蛋白也是多拷贝的嘛还是自动酶切变成单体蛋白了？
因为我的蛋白是25KD左右但诱导出来的蛋白是66-110KD之间
不知道是不是我要的
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
可以朝九晚五，也能浪迹天涯
1楼 2012-10-12 13:35:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maychao123

银虫 (小有名气)
一般串连的高拷贝系统表达出来的蛋白不会融合到一起吧，你是按文献的方法做的么？每一段目的基因前面都有加核糖体结合位点么？
赞一下 回复此楼
Don‘tforget3Oct
2楼2012-10-12 15:32:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

475502411

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by maychao123 at 2012-10-12 15:32:47
一般串连的高拷贝系统表达出来的蛋白不会融合到一起吧，你是按文献的方法做的么？每一段目的基因前面都有加核糖体结合位点么？

是按我们论坛上的操作手册做的，没有加。
我是直接把目的基因双酶切连接到PIC3.5K和PIC9K的载体上，线性化完直接转，然后诱导。
是不是做的有问题呢？
谢谢
赞一下 回复此楼
可以朝九晚五，也能浪迹天涯
3楼2012-10-12 17:45:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maychao123

银虫 (小有名气)
★ ★
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-10-15 13:40:05
我主要做的是原核表达，刚看了下你说的这两个质粒都是自带核糖体结合位点的，这样就算是在基因组上形成了高拷贝也不会造成蛋白融合的问题，应该是单体，更何况你的质粒上还带有终止区域，所以问题肯定不是因为高拷贝数造成的。http://www.dxy.cn/bbs/topic/6015595  这个不知道你看没看过，里面主要提到两个问题，一个是转化子筛选的问题，还一个是转化方法的问题，希望对你有帮助。另外你确定66-110KD之间的那个条带是诱导产物么？
赞一下 回复此楼
Don‘tforget3Oct
4楼2012-10-13 17:00:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

475502411

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by maychao123 at 2012-10-13 17:00:51
我主要做的是原核表达，刚看了下你说的这两个质粒都是自带核糖体结合位点的，这样就算是在基因组上形成了高拷贝也不会造成蛋白融合的问题，应该是单体，更何况你的质粒上还带有终止区域，所以问题肯定不是因为高拷贝 ...

有三个菌，在116-66之间有很明显的诱导条带，特别是其中的一个很明显，我明天上班的时候把图片发给你看一下
但是不知道是不是
如果得到的是单体就可能不是
不知道怎么做了
赞一下 回复此楼
可以朝九晚五，也能浪迹天涯
5楼2012-10-14 15:35:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maychao123

银虫 (小有名气)
还送我花呢，谢谢啊  这次帮你回答问题我也学到了不少关于酵母表达系统的知识。
我还想问一下，你是怎么确定你的菌在基因组上形成高拷贝了，测序了么？
赞一下 回复此楼
Don‘tforget3Oct
6楼2012-10-14 21:43:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

475502411

铜虫 (著名写手)
引用回帖:
6楼: Originally posted by maychao123 at 2012-10-14 21:43:19
还送我花呢，谢谢啊  这次帮你回答问题我也学到了不少关于酵母表达系统的知识。
我还想问一下，你是怎么确定你的菌在基因组上形成高拷贝了，测序了么？

没有，是在G418筛选的，他在1mg/ml的板上可以长，并且做PCR的时候有目的条带和2倍目的条带的
这样可以吗？
基因组可以测序吗？
谢谢
赞一下 回复此楼
可以朝九晚五，也能浪迹天涯
7楼2012-10-19 08:55:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 475502411 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 283求调剂 +8 小楼。 2026-03-12 11/550 2026-03-16 09:46 by 无际的草原
[考研] 344求调剂 +3 knight344 2026-03-16 3/150 2026-03-16 09:42 by 无际的草原
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 14/700 2026-03-15 23:53 by 不负韶华的虎
[考研] 080500，材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 本科南京大学一志愿川大药学327 +3 麦田耕者 2026-03-14 3/150 2026-03-14 20:04 by 外星文明
[考研] 复试调剂 +4 z1z2z3879 2026-03-14 5/250 2026-03-14 16:30 by JourneyLucky
[考研] 085600材料与化工 326 求调剂 +5 热爱生活ing 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:39 by JourneyLucky
[考研] 求调剂，药学 +3 归零lbm 2026-03-09 5/250 2026-03-14 02:21 by JourneyLucky
[考研] 一志愿北京化工大学材料与化工296分求调剂 +16 稻妻小编 2026-03-09 18/900 2026-03-14 02:00 by JourneyLucky
[考研] 一志愿天津大学，英一数二305分求调剂，四六级已过 +8 小小番的茄 2026-03-09 8/400 2026-03-14 01:53 by JourneyLucky
[考研] 求调剂！ +4 朔朔话 2026-03-09 4/200 2026-03-14 01:38 by JourneyLucky
[考研] 环境调剂 +6 晓看天暮看云 2026-03-09 6/300 2026-03-14 01:16 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +6 Mochaaaa 2026-03-12 7/350 2026-03-13 22:18 by 星空星月
[考研] 求调剂（材料与化工327） +4 爱吃香菜啦 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:11 by JourneyLucky
[考研] 336求调剂 +6 Iuruoh 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:06 by JourneyLucky
[考研] 工科，求调剂 +3 我887 2026-03-11 3/150 2026-03-13 21:39 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂 +4 芬达46 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:04 by ruiyingmiao
[考研] 一志愿华中师范071000，325求调剂 +5 RuitingC 2026-03-12 5/250 2026-03-13 10:43 by hyswxzs
[考研] 材料专硕274一志愿陕西师范大学求调剂 +4 薛云鹏 2026-03-13 4/200 2026-03-13 10:40 by 学员8dgXkO
[考研] 08食品或轻工求调剂，本科发表3篇sci一区top论文，一志愿南师大食品科学与工程 +3 我是一个兵， 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:21 by Yuyi.
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭