| 查看: 3018 | 回复: 10 | |||
[求助]
毕赤酵母表达蛋白纯化
|
|||
| 本人刚开始做实验，毕赤酵母用甲醇诱导表达的蛋白在培养基中，应该怎样提纯，蛋白加了His-tag标签，用镍和层析怎样处理培养基？求镍和层析的具体纯化步骤。 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 分子生化实验经验积累 |
» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有269人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 生物材料相关板块一周EPI总集以及生材应助榜
已经有97人回复
- 毕赤酵母表达一直不表达
已经有13人回复
- 组氨酸标签的问题
已经有27人回复
- 人血清白蛋白溶液颜色问题
已经有5人回复
- 带HIS标签的可溶蛋白的纯化问题
已经有20人回复
- 95KD蛋白纯化求助！！！！！！！！
已经有7人回复
- 毕赤酵母表达问题求教
已经有19人回复
- 牛血清白蛋白溶于水为什么是棕黄色的？
已经有20人回复
- 如何在蛋白纯化后去除6组氨酸(6His)标签
已经有17人回复
- gst标签蛋白的表达和纯化
已经有17人回复
- 毕赤酵母表达出蛋白但没有活性
已经有18人回复
- 毕赤酵母表达的蛋白无活性
已经有8人回复
- 毕赤酵母发酵上清液——脱色素？？
已经有23人回复
- his标签蛋白纯化，不挂柱
已经有18人回复
- 【求助/交流】用毕赤酵母表达载体pPIC9K表达蛋白时分子量的估计？
已经有4人回复
- 【求助/交流】毕赤酵母表达蛋白的奇怪现象
已经有7人回复
- 【求助/交流】原核表达蛋白纯化
已经有29人回复
lifuzhu3838
金虫 (小有名气)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 1186.8
- 帖子: 73
- 在线: 49小时
- 虫号: 1472777
- 注册: 2011-11-02
- 性别: GG
- 专业: 临床免疫学检验
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
梦中江楼(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-23 11:38:47
梦中江楼: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-07-25 08:48:46
感谢参与，应助指数 +1
梦中江楼(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-23 11:38:47
梦中江楼: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-07-25 08:48:46
这个做过 。直接离心去掉菌体，收集上清。镍柱处理好，用20mMTris、20mM磷酸二氢钠‘2水、50mM咪唑、500mM氯化钠，pH7.4做平衡液。咪唑可以看挂柱的效果调节量，氯化钠就是看后面的柱子调节了，如果不怕麻烦透析，就这么加吧。洗脱最开始还是要多设计几个咪唑梯度摸索一下的。楼上两位虫友的意见我都不是很赞同，分泌表达，肯定不用破碎的。过亲和柱没必要超滤的，除非体积特别大，上样要非常久（10h），太累。条件摸好，亲和柱一洗脱就把目的蛋白浓缩了。 |
5楼2013-07-23 09:03:39
lwiaanngg
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 46 (小学生)
- 贵宾: 0.773
- 金币: 7403.2
- 散金: 24
- 红花: 12
- 帖子: 1211
- 在线: 110.3小时
- 虫号: 43541
- 注册: 2004-04-10
- 专业: 应用高分子化学与物理
2楼2013-07-22 20:51:43
lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
- MolEPI: 58
- 应助: 388 (硕士)
- 贵宾: 0.238
- 金币: 17138.7
- 红花: 43
- 帖子: 2251
- 在线: 712.4小时
- 虫号: 111074
- 注册: 2005-11-20
- 专业: 生物化学
3楼2013-07-23 07:54:56
4楼2013-07-23 08:56:38
6楼2013-07-23 09:19:05
lxj341401
至尊木虫 (著名写手)
- MolEPI: 58
- 应助: 388 (硕士)
- 贵宾: 0.238
- 金币: 17138.7
- 红花: 43
- 帖子: 2251
- 在线: 712.4小时
- 虫号: 111074
- 注册: 2005-11-20
- 专业: 生物化学
7楼2013-07-23 09:30:51
lifuzhu3838
金虫 (小有名气)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 1186.8
- 帖子: 73
- 在线: 49小时
- 虫号: 1472777
- 注册: 2011-11-02
- 性别: GG
- 专业: 临床免疫学检验
8楼2013-07-23 15:55:16
9楼2014-05-12 20:11:31
10楼2014-10-27 16:20:13
