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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 毕赤酵母发酵上清液——脱色素？？
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erluoshi

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1楼 2011-08-17 15:39:19
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+9, MicEPI+1): xxrxjl o~ 2011-08-19 00:12:56
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-08-17 16:12:25:
活性炭吸附，离心去除活性炭

活性炭品牌不同，孔径也不同，吸附的物质大小也不同，但是很多厂家都不在外包装上标明的。

我曾经使用过几种活性炭来吸附我的粗酶液中的色素，但是效果都不算太好，酶活力会有损失。吸附时间久了，会把酶也吸附，我试过吸附10分钟和过夜的，结果过夜的酶损失稍大。

由于色素不重，所以加2%（W/V）处理，结果有一种活性炭可以去除一半色素，酶损失5%。由于活性炭也会占体积，所以如果用量太大，吸附的蛋白质会更多，所以别加太多。

由于活性炭不能经由离心完全去除，会造成OD600提高，所以从图中可以看出有的处理是OD600比原来酶液还高的。离心后用滤膜过滤，能把活性炭颗粒除去，OD600就会进一步下降。

我的对照为“原酶液不添加活性炭”，使用的活性炭分别为“粒状（天津市北长方正试剂厂，500g）”、“汕头市达濠精细化学品，500g”、“广东省台山市化工厂，500g，批号20080501”、“糖用活性炭”，如果你能买得到多个品种的活性炭，不妨也做一下我的这个实验。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
12楼2011-08-18 23:53:26
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
活性炭吸附，离心去除活性炭
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2楼2011-08-17 16:12:25
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

活性碳也吸蛋白的吧！！建议你用超滤的方法吧，可以同时置换缓冲液和浓缩
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3楼2011-08-17 22:46:40
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
3楼: Originally posted by ganchao1776 at 2011-08-17 22:46:40:
活性碳也吸蛋白的吧！！建议你用超滤的方法吧，可以同时置换缓冲液和浓缩

活性炭确实也吸附蛋白质的，但很多方法都会造成蛋白质的损失，另外，楼主说的是“细胞外产物”，不知道是蛋白质还是什么东西，要是分子量比较小，你的超滤就不起作用了。
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4楼2011-08-18 00:15:50
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-08-18 00:15:50:
活性炭确实也吸附蛋白质的，但很多方法都会造成蛋白质的损失，另外，楼主说的是“细胞外产物”，不知道是蛋白质还是什么东西，要是分子量比较小，你的超滤就不起作用了。

你说的很有道理，不过我觉的楼主是在做蛋白表达，你再问问楼主是在做什么吧？
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5楼2011-08-18 00:21:36
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erluoshi

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6楼2011-08-18 10:46:32
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erluoshi

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7楼2011-08-18 10:47:41
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erluoshi

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8楼2011-08-18 10:48:34
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erluoshi

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9楼2011-08-18 10:49:22
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

蛋白过过分子筛么？可以试试，我们实验室一个师妹酵母胞外酶表达和你的情况类似，不过在最后一步分子筛的时候色素去除了。
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The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
10楼2011-08-18 11:33:21
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