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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 毕赤酵母发酵的pH问题
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houhoujiayou

银虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母发酵的pH问题 已有2人参与

想请教一下，我做的酶最适pH在8点多，现在做重组的毕赤酵母，发酵了几批都没有测到酶活，而且用考马斯亮蓝测空白与重组菌的上清，蛋白含量没有太大的区别，跑SDS电泳也是。会不会是蛋白在这个pH会降解掉或者是不表达啊。有人做过高PH的培养么？马上要毕业了，还木有做出来，急啊~
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1楼 2012-01-04 10:35:39
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yingzan163

至尊木虫 (知名作家)
虽然不会，依然顶楼上！
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2楼2012-01-04 12:33:16
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yidC423R

银虫 (初入文坛)
mark

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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3楼2012-01-05 07:57:26
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shine372

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你的培养基的pH是多大啊？现在已经确认目的基因是正确的重组到酵母基因组上了么？你的蛋白是一点也没有表达还是表达量少呢？
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4楼2012-01-05 13:51:28
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lilong419

禁虫 (初入文坛)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
5楼2012-01-30 17:00:13
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fjch2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

酶的最适PH8，不代表这个酶不能耐受平PH5，你还是先找找资料，看看这个酶的耐受PH的范围吧，要是发酵时的PH不在这个范围内，那就有点麻烦了。
不知道有没有通过添加一下物质，能增强酶的稳定性啊？
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6楼2014-05-20 10:59:42
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你先说一下你的培养基组分都是些什么？你的培养基的pH是用的8发酵的？通常甲醇营养型毕赤酵母生长pH范围为2.0～7.5，最适生长pH为4.8-5.2，你把pH设定那么高酵母都没正常生长怎么诱导出来蛋白，而且在中性范围内蛋白酶活性都不低，不排除被蛋白酶降解的可能。
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大家相互帮助哈
7楼2014-05-20 20:09:31
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