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houhoujiayou

银虫 (小有名气)

[求助] 毕赤酵母发酵的pH问题已有2人参与

想请教一下,我做的酶最适pH在8点多,现在做重组的毕赤酵母,发酵了几批都没有测到酶活,而且用考马斯亮蓝测空白与重组菌的上清,蛋白含量没有太大的区别,跑SDS电泳也是。会不会是蛋白在这个pH会降解掉或者是不表达啊。有人做过高PH的培养么?马上要毕业了,还木有做出来,急啊~
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yingzan163

至尊木虫 (知名作家)

虽然不会,依然顶楼上!
2楼2012-01-04 12:33:16
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yidC423R

银虫 (初入文坛)

mark

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
3楼2012-01-05 07:57:26
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shine372

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
你的培养基的pH是多大啊?现在已经确认目的基因是正确的重组到酵母基因组上了么?你的蛋白是一点也没有表达还是表达量少呢?
4楼2012-01-05 13:51:28
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lilong419

禁虫 (初入文坛)

感谢参与,应助指数 +1
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5楼2012-01-30 17:00:13
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fjch2005

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

酶的最适PH8,不代表这个酶不能耐受平PH5,你还是先找找资料,看看这个酶的耐受PH的范围吧,要是发酵时的PH不在这个范围内,那就有点麻烦了。
不知道有没有通过添加一下物质,能增强酶的稳定性啊?
6楼2014-05-20 10:59:42
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luwei13566

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你先说一下你的培养基组分都是些什么?你的培养基的pH是用的8发酵的?通常甲醇营养型毕赤酵母生长pH范围为2.0~7.5,最适生长pH为4.8-5.2,你把pH设定那么高酵母都没正常生长怎么诱导出来蛋白,而且在中性范围内蛋白酶活性都不低,不排除被蛋白酶降解的可能。
大家相互帮助哈
7楼2014-05-20 20:09:31
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