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自在小雨

金虫 (初入文坛)

[求助] 请教关于毕赤酵母摇瓶发酵的问题 已有2人参与

我现在在做毕赤酵母表达外源基因的摇瓶发酵实验,每隔24小时取样,测OD值,到第96个小时时,都还正常,可是到120h时,原本应该下降的OD突然增加了,而且增加的幅度达到10左右,未染菌,就大神给个解释!!!谢谢啦~~
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+10, Thanks! 2014-04-16 08:51:17
自在小雨(laozuzunzhe代发): 金币+10, 感谢应助! 2014-04-16 08:51:58
laozuzunzhe: 金币-6, 前面忘了点代发金币,扣6了发给你4个金币哈! 2014-04-16 08:52:56
需要知道你的生长曲线,大概的OD值变化情况、培养基、表达的蛋白和表达方式。能附上大概的发酵过程最好。

按这个情况,我大胆估计一下,仅为讨论,供你参考:
个人初步认为是诱导型胞内表达,使用的基础盐培养基,碳源简单不易利用,发酵前96h菌体生长速度缓慢(15以下)。如果你的情况和我推断的大致相同,则是比较正常的。碳源不易利用,细胞生长缓慢,产生的外源蛋白较少,碳源消耗更慢;菌体逐渐适应利用此碳源,菌体生产代谢加快,OD值迅速增加。在此情况,诱导96h后蛋白表达产量也会迅速增加。我之前做过一个外源蛋白的表达,产量情况与此类似。

组成型表达盒诱导型胞外表达出现这种情况的可能性较小。总的来说,还是需要你的更加具体的实验情况,才好分析。
2楼2014-04-14 22:43:42
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by reallpf at 2014-04-14 22:43:42
需要知道你的生长曲线,大概的OD值变化情况、培养基、表达的蛋白和表达方式。能附上大概的发酵过程最好。

按这个情况,我大胆估计一下,仅为讨论,供你参考:
个人初步认为是诱导型胞内表达,使用的基础盐培养基 ...

抱歉,最后一句有个错别字。
组成型表达(“和”)诱导型胞外表达....
3楼2014-04-14 22:44:42
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自在小雨

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by reallpf at 2014-04-14 22:43:42
需要知道你的生长曲线,大概的OD值变化情况、培养基、表达的蛋白和表达方式。能附上大概的发酵过程最好。

按这个情况,我大胆估计一下,仅为讨论,供你参考:
个人初步认为是诱导型胞内表达,使用的基础盐培养基 ...

是诱导型胞外表达,96h时OD值达到了40左右,但是120h飙升至50~~太不正常了啊
实验虐我千百遍,我待实验如初恋
4楼2014-04-15 11:04:49
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
自在小雨(laozuzunzhe代发): 金币+2, 感谢应助! 2014-04-16 08:50:44
考虑可能原因:
1、蒸发太大
2、菌体OD增加整体上应该是加快的(单位体积菌体重量随时间增多,甲醇利用能力增强,生长加快)
5楼2014-04-15 11:29:44
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自在小雨

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wt3532 at 2014-04-15 11:29:44
考虑可能原因:
1、蒸发太大
2、菌体OD增加整体上应该是加快的(单位体积菌体重量随时间增多,甲醇利用能力增强,生长加快)

觉得1的可能性较大,因为每天要取样,感觉培养基的量越来越少了~~谢谢啊!
实验虐我千百遍,我待实验如初恋
6楼2014-04-15 18:26:18
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自在小雨

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by wt3532 at 2014-04-15 11:29:44
考虑可能原因:
1、蒸发太大
2、菌体OD增加整体上应该是加快的(单位体积菌体重量随时间增多,甲醇利用能力增强,生长加快)

不知道怎么给您金币,求教方法,好把金币给您呀
实验虐我千百遍,我待实验如初恋
7楼2014-04-16 16:41:43
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fjch2005

金虫 (小有名气)

摇瓶培养的酵母,蒸发量有多大啊?
8楼2014-05-20 14:04:04
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学不明白

新虫 (初入文坛)

为什么要每天测OD?呢
9楼2015-01-19 09:28:41
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