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嘉笛

木虫 (小有名气)

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[求助] 求助：毕赤酵母电转化

各位虫友有没有用过bio-rad的电转仪电转毕赤酵母，想问下用机子的预设模式电转效果怎么样啊

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1楼 2011-06-27 19:57:10

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gwbk

木虫 (正式写手)

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西瓜(金币+3): 鼓励交流 2011-06-28 18:28:27

实验室在用biorad的电转仪，没有做过毕赤酵母，做的是大肠杆菌。但是有几点经验可以参考。
1，我常用的是biorad推荐的大肠杆菌的1800V，200欧姆，25uF设置，自制感受态，没有电火花，一般会成功；使用购买的transT1，DH5a，电火花啪啪直响，但是也未必失败，至少有2次试验，都是打了电火花之后，不甘心，涂平板长出来菌，测序验证正确的，打了电火花，细菌基本上都被电死了，很少能吸收了质粒又活下来的，长出来算是幸运，长不出来那是预料之中。。。
2，使用过更高的电压甚至2500v，电击时间没有注意过，应该不会超过5ms吧。和1800转化结果没有太大区别。

试验做多了就没有这么多问题了。有一次我同学化学转化放在50℃，90s，都能长出来菌。多积累点经验，试验可以多摸索摸索，没关系的，做错了重做呗，说句不负责任的话，金子又不是你自己出，关键是学到东西。分子生物很神奇，预料不到的结果都很难说，试验不顺利，几个月干耗，试验顺利，一年的工作，个半月搞定。。。