应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】毕赤酵母表达
201/1返回列表
查看: 1986  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

pidou213

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】毕赤酵母表达

本人在电转整合目的基因至酵母中后，然后提取酵母基因组，并PCR扩增，然后测序鉴定，发现序列没有任何问题。但是在做Western的时候却做不出条带，请问有什么可能？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-01-22 00:31:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)
★
dhd997(金币+1): 谢谢交流 2011-02-18 10:48:14
ORF是否正确。
回复此楼
3楼2011-01-22 10:19:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-01-22 10:19:17:
ORF是否正确。

绝对正确
回复此楼
4楼2011-01-22 11:01:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cxl_yll

木虫 (正式写手)
pidou213(金币+1): 元宵节快乐 2011-02-17 21:38:43
pidou213(金币+1): 2011-08-06 14:06:21
你用的什么载体啊？启动子对不？实在不行做个RT-PCR看看能出来东西不？
赞一下 回复此楼
5楼2011-02-17 13:36:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by cxl_yll at 2011-02-17 13:36:06:
你用的什么载体啊？启动子对不？实在不行做个RT-PCR看看能出来东西不？

可能是因为挑取的菌斑太少了，呵呵 谢谢啊
赞一下 回复此楼
6楼2011-02-17 21:38:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

旋木晴晴

金虫 (小有名气)
pidou213(金币+1): 2011-08-06 14:06:17
没有表达
回复此楼
7楼2011-02-18 09:57:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 旋木晴晴 at 2011-02-18 09:57:35:
没有表达

你觉得为什么没表达呢？
赞一下 回复此楼
8楼2011-02-18 12:04:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rioarsenal

金虫 (正式写手)
pidou213(金币+1): 2011-08-06 14:06:39
引用回帖:
Originally posted by pidou213 at 2011-01-22 00:31:28:
本人在电转整合目的基因至酵母中后，然后提取酵母基因组，并PCR扩增，然后测序鉴定，发现序列没有任何问题。但是在做Western的时候却做不出条带，请问有什么可能？

楼主检查载体了么，启动子有没有问题啊？

另外表达的蛋白是胞内还是胞外？
赞一下 回复此楼
9楼2011-02-18 14:43:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2011-02-18 06:43:58:
楼主检查载体了么，启动子有没有问题啊？

另外表达的蛋白是胞内还是胞外？

启动子的意思是？？

我表达的是胞内
赞一下 回复此楼
10楼2011-02-19 01:27:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

旋木晴晴

金虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by pidou213 at 2011-02-18 04:04:31:
你觉得为什么没表达呢？

没有表达的原因可能很多吧，载体（启动子）没有选好，密码子偏爱性问题等等
赞一下 回复此楼
11楼2011-02-19 14:09:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jingxiu999

新虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
你好，我电转化后怎么老是筛选不到重组子呢？你pcr的模板用的是提取的基因组吗？还是用的菌斑
赞一下(1人) 回复此楼
12楼2011-06-23 11:42:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by rioarsenal at 2011-02-18 14:43:58:
楼主检查载体了么，启动子有没有问题啊？

另外表达的蛋白是胞内还是胞外？

胞内表达的话 破碎的时候用涡旋仪可以吗？2500rpm
赞一下 回复此楼
13楼2011-06-23 12:29:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by jingxiu999 at 2011-06-23 11:42:16:
你好，我电转化后怎么老是筛选不到重组子呢？你pcr的模板用的是提取的基因组吗？还是用的菌斑

我用的是提取DNA然后PCR的方法
赞一下 回复此楼
14楼2011-06-23 12:30:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rioarsenal

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by pidou213 at 2011-02-19 01:27:06:
启动子的意思是？？

我表达的是胞内

启动子，基因表达必须的啊。没它如何转录。另外，目的基因有没有内含子序列啊，在酵母里能否正确剪切？细胞内的蛋白要破细胞，是否操作过程中有损失呢？为何不改成分泌蛋白呢？
赞一下(1人) 回复此楼
15楼2011-08-11 06:26:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hkfgwww

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by pidou213 at 2011-02-19 01:27:06:
启动子的意思是？？

我表达的是胞内

不知道启动子？启动子错误的话DNA不会转录的，更被说表达了。
赞一下(1人) 回复此楼
16楼2011-08-11 15:28:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
1楼: Originally posted by pidou213 at 2011-01-22 00:31:28:
本人在电转整合目的基因至酵母中后，然后提取酵母基因组，并PCR扩增，然后测序鉴定，发现序列没有任何问题。但是在做Western的时候却做不出条带，请问有什么可能？

如果直接电泳能看到带的话，说明你的wesrern有问题
赞一下(1人) 回复此楼
17楼2011-08-18 00:07:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tcguobing

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
表达的蛋白会不会是膜结合蛋白？或者没有表达？能都做个功能验证啥的？
赞一下(1人) 回复此楼
18楼2011-08-18 18:53:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
18楼: Originally posted by tcguobing at 2011-08-18 18:53:43:
表达的蛋白会不会是膜结合蛋白？或者没有表达？能都做个功能验证啥的？

没明白什么意思
回复此楼
19楼2011-08-19 00:09:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tcguobing

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
19楼: Originally posted by pidou213 at 2011-08-19 00:09:55:
没明白什么意思

除了做western没有其他方法可以验证目的基因表达了么？之前也碰到过一种情况，表达的蛋白是结合到细胞膜上的话，做western是做不出条带的。因为目前为止还没有很好的分离膜结合蛋白的方法。个人认为，你可以先预测一下你要表达基因的跨膜结构。个人见解，仅供参考
赞一下(1人) 回复此楼
20楼2011-08-19 09:34:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
huigoo2楼
2011-01-22 04:33   回复  
相关版块跳转 我要订阅楼主 pidou213 的主题更新
201/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭