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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】有关毕赤酵母
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tomato895

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1楼 2011-03-11 23:04:08
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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)
★
李喜鹏198705(金币+5):谢谢参与
看质粒图谱，没切到关键部位就可以啊，
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3楼2011-03-11 23:34:31
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zhengfan1109

银虫 (正式写手)
★ ★ ★
李喜鹏198705(金币+5):谢谢参与
lstt09nk(金币+2): 欢迎常来~~希望你的回答对楼主有所帮助 2011-03-12 09:41:10
质粒线性化时用SglII，转入KM71 中，但是操作手册上说KM71用SacI这个酶，

首先，你可以用Sal I切，这样你的问题就没了。
如果没有这种酶，使用Sg影响与否应该要看它会把目的序列切了吗。
如果没有，应该没有问题的。
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4楼2011-03-12 00:30:30
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phoenix211

金虫 (小有名气)
★
李喜鹏198705(金币+5):谢谢参与
只要这个酶不会把你的目的基因切断，并且可以把质粒上需要发生重组的部分切开就可以了。质粒上除了手册上推荐的那几个线性化位点，还有好几个替换位点。
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8楼2011-03-12 01:28:14
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susizheng

木虫 (著名写手)
★
李喜鹏198705(金币+5):谢谢参与
看天: 除非楼主本人要求，否则没有相应版规依据来处理 2011-03-12 12:56:52
选择操作手册上几个推荐的酶切位点吧，如果推荐的几个酶切位点在你的基因中存在，再考虑其他。
PS：楼上有用表情刷积分的，希望斑竹严肃处理。
另外楼主以后悬赏金币最好手动发放。

[ Last edited by susizheng on 2011-3-12 at 10:00 ]
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10楼2011-03-12 09:58:50
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liang33231

银虫 (小有名气)
★
李喜鹏198705(金币+5):谢谢参与
说实话 金币吸引了我  呵呵··· 帮顶··
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11楼2011-03-12 13:02:08
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worm2010

金虫 (小有名气)
★
李喜鹏198705(金币+5):谢谢参与
如果你的目的基因中没有该酶切位点的话，就没什么影响，首先保证这个线性化酶不能把你的目的基因切断才行
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12楼2011-04-19 10:27:29
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lizhijiang

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
做一下对比实验吧，要不下面的工作就白做了。
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13楼2011-04-19 16:39:50
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tomato895

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
送鲜花一朵
我也遇到了同样的问题，推荐的酶切位点在目的基因上出现，然后选择了重组基因上的其他一个酶切位点，不知道结果会如何。楼主现在进展如何？
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14楼2012-03-13 07:00:49
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小丹木木

荣誉版主 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
肯定有问题了，毕赤酵母是同源重组，如果线性化的位置不对，是不能得到较好的转化子的，还是要按照操作手册来啊
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15楼2012-03-13 10:25:39
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一直寻觅2楼
2011-03-11 23:15   回复  
李喜鹏198705(金币+5):谢谢参与
wolaiye5楼
2011-03-12 00:56   回复  
李喜鹏198705(金币+5):谢谢参与
ruiazi6楼
2011-03-12 01:04   回复  
李喜鹏198705(金币+5):谢谢参与
ruiazi7楼
2011-03-12 01:05   回复  
zyxme9楼
2011-03-12 02:40   回复  
李喜鹏198705(金币+5):谢谢参与
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