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汕头大学海洋科学接受调剂
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匿名

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gongeleven

铁杆木虫 (正式写手)



李喜鹏198705(金币+5):谢谢参与
看质粒图谱,没切到关键部位就可以啊,
3楼2011-03-11 23:34:31
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zhengfan1109

银虫 (正式写手)


★ ★ ★
李喜鹏198705(金币+5):谢谢参与
lstt09nk(金币+2): 欢迎常来~~希望你的回答对楼主有所帮助 2011-03-12 09:41:10
质粒线性化时用SglII,转入KM71 中,但是操作手册上说KM71用SacI这个酶,

首先,你可以用Sal I切,这样你的问题就没了。
如果没有这种酶,使用Sg影响与否应该要看它会把目的序列切了吗。
如果没有,应该没有问题的。
4楼2011-03-12 00:30:30
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phoenix211

金虫 (小有名气)



李喜鹏198705(金币+5):谢谢参与
只要这个酶不会把你的目的基因切断,并且可以把质粒上需要发生重组的部分切开就可以了。质粒上除了手册上推荐的那几个线性化位点,还有好几个替换位点。
8楼2011-03-12 01:28:14
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李喜鹏198705(金币+5):谢谢参与
看天: 除非楼主本人要求,否则没有相应版规依据来处理 2011-03-12 12:56:52
选择操作手册上几个推荐的酶切位点吧,如果推荐的几个酶切位点在你的基因中存在,再考虑其他。
PS:楼上有用表情刷积分的,希望斑竹严肃处理。
另外楼主以后悬赏金币最好手动发放。

[ Last edited by susizheng on 2011-3-12 at 10:00 ]
10楼2011-03-12 09:58:50
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liang33231

银虫 (小有名气)



李喜鹏198705(金币+5):谢谢参与
说实话 金币吸引了我  呵呵··· 帮顶··
11楼2011-03-12 13:02:08
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worm2010

金虫 (小有名气)



李喜鹏198705(金币+5):谢谢参与
如果你的目的基因中没有该酶切位点的话,就没什么影响,首先保证这个线性化酶不能把你的目的基因切断才行
12楼2011-04-19 10:27:29
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lizhijiang

木虫 (著名写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
做一下对比实验吧,要不下面的工作就白做了。
13楼2011-04-19 16:39:50
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tomato895

银虫 (初入文坛)



小木虫(金币+0.5): 给个红包,谢谢回帖
送鲜花一朵
我也遇到了同样的问题,推荐的酶切位点在目的基因上出现,然后选择了重组基因上的其他一个酶切位点,不知道结果会如何。楼主现在进展如何?
14楼2012-03-13 07:00:49
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小木虫(金币+0.5): 给个红包,谢谢回帖
肯定有问题了,毕赤酵母是同源重组,如果线性化的位置不对,是不能得到较好的转化子的,还是要按照操作手册来啊
15楼2012-03-13 10:25:39
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简单回复
2011-03-11 23:15   回复  
李喜鹏198705(金币+5):谢谢参与
wolaiye5楼
2011-03-12 00:56   回复  
李喜鹏198705(金币+5):谢谢参与
ruiazi6楼
2011-03-12 01:04   回复  
李喜鹏198705(金币+5):谢谢参与
ruiazi7楼
2011-03-12 01:05   回复  
zyxme9楼
2011-03-12 02:40   回复  
李喜鹏198705(金币+5):谢谢参与
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