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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】毕赤酵母表达
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pidou213

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】毕赤酵母表达

本人在电转整合目的基因至酵母中后，然后提取酵母基因组，并PCR扩增，然后测序鉴定，发现序列没有任何问题。但是在做Western的时候却做不出条带，请问有什么可能？
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1楼 2011-01-22 00:31:28
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tcguobing

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
19楼: Originally posted by pidou213 at 2011-08-19 00:09:55:
没明白什么意思

除了做western没有其他方法可以验证目的基因表达了么？之前也碰到过一种情况，表达的蛋白是结合到细胞膜上的话，做western是做不出条带的。因为目前为止还没有很好的分离膜结合蛋白的方法。个人认为，你可以先预测一下你要表达基因的跨膜结构。个人见解，仅供参考
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20楼2011-08-19 09:34:23
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pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by lxj341401 at 2011-01-22 10:19:17:
ORF是否正确。

绝对正确
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4楼2011-01-22 11:01:38
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cxl_yll

木虫 (正式写手)
pidou213(金币+1): 元宵节快乐 2011-02-17 21:38:43
pidou213(金币+1): 2011-08-06 14:06:21
你用的什么载体啊？启动子对不？实在不行做个RT-PCR看看能出来东西不？
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5楼2011-02-17 13:36:06
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pidou213

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by cxl_yll at 2011-02-17 13:36:06:
你用的什么载体啊？启动子对不？实在不行做个RT-PCR看看能出来东西不？

可能是因为挑取的菌斑太少了，呵呵 谢谢啊
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6楼2011-02-17 21:38:30
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