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shenmofeng

新虫 (初入文坛)

[求助] 摇瓶发酵菌丝结团

黑曲霉摇瓶发酵产柠檬酸,培养基成分为木薯液化液加硫酸铵,种子液接种,30℃200rpm培养,菌丝结团如图,目测直径1mm以上了,最后产酸低,残糖高,发酵异常。
文献中记载柠檬酸高产菌的特征是形成小菌丝球(小于0.1mm)而不是结成这么大的球,请问造成这样的原因是什么呢?谢谢!


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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
rainwander(金币+5): 鼓励交流 2011-05-12 07:36:19
rainwander(EPI+1): 2011-05-12 07:36:23
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-05-12 00:06:21:
1、        你是这么小的摇瓶发酵,如果要做什么培养基优化,我觉得最好还是用孢子接种。
2、        你的木薯没有去皮,皮是渣,没有营养的,最好自己刮掉。木薯也要按照工厂的要求来粉碎,要过多少目的筛子就照过。生产酒精的 ...

这个是正式回复帖,因为上一张不能上传附件。

1、        你是这么小的摇瓶发酵,如果要做什么培养基优化,我觉得最好还是用孢子接种。
2、        你的木薯没有去皮,皮是渣,没有营养的,最好自己刮掉。木薯也要按照工厂的要求来粉碎,要过多少目的筛子就照过。生产酒精的时候是过20目筛子的,不知道你这个要过多少目。原料粉碎之后渣会碎很多。
3、        你的液化醪是自己制作的吗?液化率能不能保证每次都一致?
4、        培养温度用30度不知道是否合适,也可能会有些影响的,我见有人优化过温度,也有人能没有用30度,他们都是用黑曲霉,不知道对于你的菌株你用的30度是不是最好的。
5、        摇床的转速也是,有人用300rpm的,你的200rpm不知道是不是经过优化过的。
6、        提高接种量确实是能够提高菌丝球数量和减小菌丝球尺寸的,因为在摇动的过程中菌丝球的生长也会受到影响,太密集了就长不开了。由于在摇动,菌丝球到一定大小之后不会纠缠在一起了。
7、        摇瓶发酵的时候瓶壁上的那一圈是不可避免的,不用在意这个问题。
8、        至于工厂里是不是离心,我觉得如果发酵罐太大,离心还是麻烦了些,但是去皮不麻烦。具体就要问问工厂里怎么做了,这个可能导师了解。
9、        菌丝球肯定是会形成的,凡是摇瓶培养,这个转速和这个装液量下应该都会形成,但是成菌丝球不一定是造成发酵异常的原因。
10、        你以前有没有做过黑曲霉产柠檬酸,感觉似乎经验少了些。附件放上一篇黑曲霉用木薯液化醪发酵产柠檬酸的国内文章,就是不知道是不是适合你。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
15楼2011-05-12 00:09:02
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普通回帖

microxy

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


wolfebst(金币+1): 鼓励一下 2011-05-10 14:36:47
菌丝球大小的形成影响因素很多,比如接种量 、PH等因素 有关菌丝球大小形态与产率的文献很多,建议查阅!
2楼2011-05-10 11:18:01
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microxy

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

糖类的利用率不高,可能与生长不良有关,建议适当提高转速,或者降低培养液的粘度。
3楼2011-05-10 11:20:00
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microxy

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖


rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-05-10 15:52:34
从你的图片大概可以看出:培养液粘度可能比较大,形成菌丝球的霉菌培养后,培养液一般澄清,粘度大,影响DO,所以糖类利用率不高。
4楼2011-05-10 11:26:49
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kissyls

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


wolfebst(金币+1): 鼓励一下 2011-05-10 14:37:12
你的培养基比较粘稠,摇瓶跟发酵罐比较,主要是发酵罐有挡板,不易结成菌球,而摇瓶壁光滑,易结成菌球,建议你提高点转速,在看下还有这么大菌球没.
我像只鱼儿在你的荷塘,只为和你守候那皎白月光.游过了四季荷花依然香,等你宛在水中央.
5楼2011-05-10 14:26:53
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mchen6760

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


wolfebst(金币+1): 鼓励交流 2011-05-11 15:22:23
培养基比较黏稠会不会和淀粉液化情况有关系?如果是溶氧不足造成菌丝球较大,产酸低,试试摇瓶中加玻璃珠或者采用挡板摇瓶,看看效果如何?
6楼2011-05-10 21:07:45
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郝钊

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-05-12 07:34:27
产酸低,残糖高是不是因为发酵时间还不够?可以摸一个时间的条件,看是不是发酵时间在影响产率。如果你想让菌丝球小一些,可以尝试加入玻璃珠或者弹簧之类的东西。菌丝球的大小可能是影响结果的一个因素,但是发酵是个很复杂的事情,很多原因都影响最终结果,多看看相关文献,多摸索。
7楼2011-05-11 00:14:20
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★
shenmofeng(金币+15): 多谢 2011-05-11 10:16:51
rainwander(金币+3, EPI+1): 解答的很详细~ 2011-05-12 07:35:36
装液量看样子应该是三角瓶容积的五分之一左右,也就是说如果用的是500毫升的瓶子,你的装液量就是100毫升。这个装液量在200rpm的转速下培养基的转动情况是非常剧烈的,如果接种量比较大,菌丝球的大小也会比较小,从你的图片上看,大小没有异常。装液量不是原因。

黑曲霉在30度下培养是没有问题的,温度不是原因。

培养液的颜色跟我的有点不同,你的颜色发红,我的木薯液化醪不是这个颜色,除非是你的黑曲霉产生色素。或者你的木薯没有去皮就粉碎做成这个,很多木薯的皮是红色的。

你的三角瓶瓶壁上黑曲霉的孢子不多,如果正常,液化醪中的某些比较小的固形物在摇动的过程中会沾一点在瓶壁上,培养基能达到多高就沾在多高的地方,然后黑曲霉会在上面生长,产孢子。从孢子的数量来看,你的培养时间至少是已经3天了,就是不知道别人做这个实验的时候用多久的培养时间。或许你可以做一个柠檬酸的产生曲线,因为别人的时间不一定适合你的菌。

液化醪中会有一点儿渣,菌丝会以渣为中心发展出去的,可能会造成菌丝球偏大。想到这里,我记得似乎你发帖说过液化醪要不要离心的,看样子你似乎没有离心好,或者是根本没有离心。
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8楼2011-05-11 01:41:13
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gaoqian8717

金虫 (小有名气)

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★ ★
rainwander(金币+2): 鼓励交流 2011-05-12 07:35:46
我前一段时间也遇到与楼主类似的情况,我的是土曲霉生产有机酸的,后来才知道是因为pH的原因,以前pH是4.0-5.0,接多少孢子都成球;后来查阅文献后把pH调成2.0-3.0,就不会成球了,或者成球很小很小了。
接种量小了也会成球的。
仅供参考,可以做实验摸索摸索。
9楼2011-05-11 09:10:54
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shenmofeng

新虫 (初入文坛)

十分感谢各位的分析!小弟金币不多不能面面俱到,还请包涵:dnd:
10楼2011-05-11 10:18:37
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