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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】考马氏亮蓝G－250染色法测蛋白含量结果偏低
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panel

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】考马氏亮蓝G－250染色法测蛋白含量结果偏低 已有6人参与

我用考马斯亮蓝法测脂肪酶的含量，配制的酶溶液为5mg/mL，可是用考马斯亮蓝法测出来的浓度仅有40ug/mL，不知道是什么问题，求明白的兄弟姐妹们帮我指点迷津
补充：我考马斯亮蓝G250跟酶液都是新配的。酶液配制：称取250mg 脂肪酶配成5mg /mL的溶液。标曲测出来没什么大问题，跟之前测定的稍微有点变化，可是用来标定酶浓度时差的太多了，不知道说的明不明白

[ Last edited by panel on 2010-10-11 at 12:46 ]
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宁缺毋滥
1楼 2010-10-10 21:30:08
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

stanfie

新虫 (初入文坛)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
dhd997(金币+1):有道理。鼓励交流。 2010-10-14 11:01:46
要测得样品的吸光值在考马斯标准曲线的吸光值范围内才有好的线性关系 才能用那个标准曲线去算
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11楼2010-10-14 09:49:15
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普通回帖

panel

金虫 (小有名气)
没高手来指点一下么
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宁缺毋滥
2楼2010-10-10 22:09:05
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aga0110125

银虫 (小有名气)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-11 10:31:30
panel(金币+1):嗯，是需要换种方法看看了 2010-10-11 12:38:37
考马斯亮蓝法不是很稳定，批次间差异会比较大，你如果要做比较精确的实验，最好换种方法
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3楼2010-10-11 09:02:10
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yyqqzz

金虫 (小有名气)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-10-11 12:12:08
panel(金币+1):我标准曲线跟样品一起测了的，可是还是不准 2010-10-11 12:39:13
重新做标准曲线测一下系数可能会好点
这种方法本身不精确，你可以预测一个摩尔消光系数用紫外吸收法来做啊
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4楼2010-10-11 11:32:22
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panel

金虫 (小有名气)
我标曲跟样品一块测的，再说我觉得有差别也不会差这么多吧，误差也太大了
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宁缺毋滥
5楼2010-10-11 12:40:01
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aga0110125

银虫 (小有名气)
panel(金币+1):大致的原因能列几个吗，我想看看我做的有什么问题 2010-10-11 23:14:55
就是因为可影响的因素太多才不稳定，也不知道哪里出了问题，O(∩_∩)O~想当初我本科论文就选的这个方法，结果研究生的老板一看就问为什么选这个方法，极度不稳定，搞得我无语了半天说，“我不是做了以后才知道不稳定的嘛！”
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6楼2010-10-11 15:39:50
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)
panel(金币+1):嗯，谢谢，我稀释过了测定过，结果还是偏低的 2010-10-11 23:14:15
此种方法要求的样品浓度不能太高，不然出入会很大。你的样品浓度太大，所以要稀释后进行测定。
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7楼2010-10-11 15:50:51
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aga0110125

银虫 (小有名气)
panel(金币+1):哈哈~~~ 2010-10-12 11:45:48
引用回帖:
Originally posted by aga0110125 at 2010-10-11 15:39:50:
就是因为可影响的因素太多才不稳定，也不知道哪里出了问题，O(∩_∩)O~想当初我本科论文就选的这个方法，结果研究生的老板一看就问为什么选这个方法，极度不稳定，搞得我无语了半天说，“我不是做了以后才知道不稳 ...

N年前的实验了，哪里还记得，就是当时的情形让我太记忆深刻而已，第一次见老板就那么无语中！
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8楼2010-10-12 11:33:16
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yongsu2009

铜虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
蛋白质样品浓度在100ug/ml以内，用考马斯亮蓝才有线性关系，浓度再高就没这种关系了，所以你要稀释样品！
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9楼2010-10-12 13:15:01
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lhj_890

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by aga0110125 at 2010-10-11 09:02:10:
考马斯亮蓝法不是很稳定，批次间差异会比较大，你如果要做比较精确的实验，最好换种方法

请问测定脂肪酶含量的话，哪种方法准确易行呢？
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未来掌握在自己手中，自立、自强、奋发向上！
10楼2010-10-12 13:16:01
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