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panel

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】考马氏亮蓝G-250染色法测蛋白含量结果偏低 已有6人参与

我用考马斯亮蓝法测脂肪酶的含量,配制的酶溶液为5mg/mL,可是用考马斯亮蓝法测出来的浓度仅有40ug/mL,不知道是什么问题,求明白的兄弟姐妹们帮我指点迷津
补充:我考马斯亮蓝G250跟酶液都是新配的。酶液配制:称取250mg 脂肪酶配成5mg /mL的溶液。标曲测出来没什么大问题,跟之前测定的稍微有点变化,可是用来标定酶浓度时差的太多了,不知道说的明不明白

[ Last edited by panel on 2010-10-11 at 12:46 ]
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宁缺毋滥
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yongsu2009

铜虫 (小有名气)

★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
蛋白质样品浓度在100ug/ml以内,用考马斯亮蓝才有线性关系,浓度再高就没这种关系了,所以你要稀释样品!
9楼2010-10-12 13:15:01
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panel

金虫 (小有名气)

没高手来指点一下么
宁缺毋滥
2楼2010-10-10 22:09:05
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aga0110125

银虫 (小有名气)

★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-11 10:31:30
panel(金币+1):嗯,是需要换种方法看看了 2010-10-11 12:38:37
考马斯亮蓝法不是很稳定,批次间差异会比较大,你如果要做比较精确的实验,最好换种方法
3楼2010-10-11 09:02:10
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yyqqzz

金虫 (小有名气)

★
dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-10-11 12:12:08
panel(金币+1):我标准曲线跟样品一起测了的,可是还是不准 2010-10-11 12:39:13
重新做标准曲线测一下系数可能会好点
这种方法本身不精确,你可以预测一个摩尔消光系数用紫外吸收法来做啊
4楼2010-10-11 11:32:22
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