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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】考马氏亮蓝G－250染色法测蛋白含量结果偏低
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panel

金虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】考马氏亮蓝G－250染色法测蛋白含量结果偏低 已有6人参与

我用考马斯亮蓝法测脂肪酶的含量，配制的酶溶液为5mg/mL，可是用考马斯亮蓝法测出来的浓度仅有40ug/mL，不知道是什么问题，求明白的兄弟姐妹们帮我指点迷津
补充：我考马斯亮蓝G250跟酶液都是新配的。酶液配制：称取250mg 脂肪酶配成5mg /mL的溶液。标曲测出来没什么大问题，跟之前测定的稍微有点变化，可是用来标定酶浓度时差的太多了，不知道说的明不明白

[ Last edited by panel on 2010-10-11 at 12:46 ]
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宁缺毋滥
1楼 2010-10-10 21:30:08
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aga0110125

银虫 (小有名气)
panel(金币+1):大致的原因能列几个吗，我想看看我做的有什么问题 2010-10-11 23:14:55
就是因为可影响的因素太多才不稳定，也不知道哪里出了问题，O(∩_∩)O~想当初我本科论文就选的这个方法，结果研究生的老板一看就问为什么选这个方法，极度不稳定，搞得我无语了半天说，“我不是做了以后才知道不稳定的嘛！”
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6楼2010-10-11 15:39:50
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panel

金虫 (小有名气)
没高手来指点一下么
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宁缺毋滥
2楼2010-10-10 22:09:05
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aga0110125

银虫 (小有名气)
★
dhd997(金币+1):谢谢交流。 2010-10-11 10:31:30
panel(金币+1):嗯，是需要换种方法看看了 2010-10-11 12:38:37
考马斯亮蓝法不是很稳定，批次间差异会比较大，你如果要做比较精确的实验，最好换种方法
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3楼2010-10-11 09:02:10
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yyqqzz

金虫 (小有名气)
★
dhd997(金币+1):鼓励交流。 2010-10-11 12:12:08
panel(金币+1):我标准曲线跟样品一起测了的，可是还是不准 2010-10-11 12:39:13
重新做标准曲线测一下系数可能会好点
这种方法本身不精确，你可以预测一个摩尔消光系数用紫外吸收法来做啊
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4楼2010-10-11 11:32:22
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