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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 发酵/表达 » 请教关于毕赤酵母摇瓶发酵的问题
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自在小雨

金虫 (初入文坛)

[求助] 请教关于毕赤酵母摇瓶发酵的问题 已有2人参与

我现在在做毕赤酵母表达外源基因的摇瓶发酵实验，每隔24小时取样，测OD值，到第96个小时时，都还正常，可是到120h时，原本应该下降的OD突然增加了，而且增加的幅度达到10左右，未染菌，就大神给个解释！！！谢谢啦~~
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1楼 2014-04-14 16:09:58
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by reallpf at 2014-04-14 22:43:42
需要知道你的生长曲线，大概的OD值变化情况、培养基、表达的蛋白和表达方式。能附上大概的发酵过程最好。

按这个情况，我大胆估计一下，仅为讨论，供你参考：
个人初步认为是诱导型胞内表达，使用的基础盐培养基 ...

抱歉，最后一句有个错别字。
组成型表达（“和”）诱导型胞外表达....
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3楼2014-04-14 22:44:42
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reallpf

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+10, Thanks！ 2014-04-16 08:51:17
自在小雨(laozuzunzhe代发): 金币+10, 感谢应助！ 2014-04-16 08:51:58
laozuzunzhe: 金币-6, 前面忘了点代发金币，扣6了发给你4个金币哈！ 2014-04-16 08:52:56
需要知道你的生长曲线，大概的OD值变化情况、培养基、表达的蛋白和表达方式。能附上大概的发酵过程最好。

按这个情况，我大胆估计一下，仅为讨论，供你参考：
个人初步认为是诱导型胞内表达，使用的基础盐培养基，碳源简单不易利用，发酵前96h菌体生长速度缓慢（15以下）。如果你的情况和我推断的大致相同，则是比较正常的。碳源不易利用，细胞生长缓慢，产生的外源蛋白较少，碳源消耗更慢；菌体逐渐适应利用此碳源，菌体生产代谢加快，OD值迅速增加。在此情况，诱导96h后蛋白表达产量也会迅速增加。我之前做过一个外源蛋白的表达，产量情况与此类似。

组成型表达盒诱导型胞外表达出现这种情况的可能性较小。总的来说，还是需要你的更加具体的实验情况，才好分析。
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2楼2014-04-14 22:43:42
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自在小雨

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by reallpf at 2014-04-14 22:43:42
需要知道你的生长曲线，大概的OD值变化情况、培养基、表达的蛋白和表达方式。能附上大概的发酵过程最好。

按这个情况，我大胆估计一下，仅为讨论，供你参考：
个人初步认为是诱导型胞内表达，使用的基础盐培养基 ...

是诱导型胞外表达，96h时OD值达到了40左右，但是120h飙升至50~~太不正常了啊
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实验虐我千百遍，我待实验如初恋
4楼2014-04-15 11:04:49
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wt3532

木虫 (著名写手)

涛声依旧

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
自在小雨(laozuzunzhe代发): 金币+2, 感谢应助！ 2014-04-16 08:50:44
考虑可能原因：
1、蒸发太大
2、菌体OD增加整体上应该是加快的（单位体积菌体重量随时间增多，甲醇利用能力增强，生长加快）
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5楼2014-04-15 11:29:44
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