24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 1851  |  回复: 6

yakamoz294

新虫 (初入文坛)

[求助] 毕赤酵母电转后PCR验证问题 已有1人参与

我的目的基因片段长度为2781,连接到9K载体上,电转后从MD平板上挑取菌落提取基因组用5AOX和3AOX引物进行验证。之前就出现过这种情况,只能P出2200kb的片段,p不出目的基因片段,后来换了一种预混的taq酶就好了,但是现在又不行了,又是p不出目的基因了,怎么办,可不可以通过调整PCR条件来改善呢
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
PCR是否做了阳性对照?用于PCR的基因组模板是否定量?
2楼2013-12-08 17:07:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+2, 鼓励交流 2013-12-08 18:55:31
酵母的菌落PCR比较难做,主要是在酵母的细胞壁比大肠杆菌的厚,不容易被煮开,我一般是这么做的
1. 挑取酵母菌落,稀释在水中,然后放PCR仪,100度煮12min
2. 离心取上清,做PCR

你可以试一下,祝好运!
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2013-12-08 17:35:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lymic07

禁虫 (初入文坛)

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-08 18:55:39
本帖内容被屏蔽

4楼2013-12-08 18:06:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yakamoz294

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by lymic07 at 2013-12-08 18:06:14
楼主的情况正好跟我相反,我最近也在做酵母基因组的PCR,我的目的基因700bp左右,用普通的pfu不好P处目的条带来,还有基因组本身的2.2kb的条带,后来我用的预混的taq酶,能够P出目的条带,而且5μl点样电泳,条带很 ...

谢谢哦,可是怎么送你金币呀
5楼2013-12-12 18:47:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

风云1

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-08 17:35:39
酵母的菌落PCR比较难做,主要是在酵母的细胞壁比大肠杆菌的厚,不容易被煮开,我一般是这么做的
1. 挑取酵母菌落,稀释在水中,然后放PCR仪,100度煮12min
2. 离心取上清,做PCR

你可以试一下,祝好运!

我是煮 冻煮的方式做的模板,5AOX和3AOX做引物也P不出来啊
6楼2016-03-14 15:32:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wang2568

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

普通的taq比pfu扩增效率高,但是酵母壁比较厚,可以试着增加培养时间或者做破壁处理

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
7楼2016-03-14 17:18:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 yakamoz294 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿南航,数一英一学硕317求调剂!! +6 Acaciad 2026-04-04 6/300 2026-04-06 12:13 by 考研学校招点人
[考研] 一志愿南昌大学,085600,344分求调剂 +9 调剂上岸玘 2026-04-05 10/500 2026-04-06 09:30 by dongzh2009
[考研] 316求调剂 +5 yyx想调剂 2026-04-05 5/250 2026-04-05 22:22 by 咔咔咔咔9
[考研] 085600,320分求调剂 +7 大馋小子 2026-04-01 8/400 2026-04-05 21:19 by 学员8dgXkO
[考研] 304求调剂(085602,过四级,一志愿985) +15 化工人999 2026-04-04 15/750 2026-04-05 16:25 by 我是电风扇r
[考研] 283分求调剂 +9 试试看呗 2026-04-04 9/450 2026-04-05 10:27 by 果冻大王
[考研] 考研调剂 +5 四川王涛 2026-04-04 5/250 2026-04-04 22:18 by 啵啵啵0119
[考研] 22408求调剂 354分 可跨专业 +3 hannnnnnn 2026-04-04 3/150 2026-04-04 14:35 by 土木硕士招生
[考研] 0856调剂 +8 曲听筠 2026-03-30 8/400 2026-04-04 08:46 by tianyyysss
[考研] 调剂0855-288 +5 x熊二a 2026-04-03 5/250 2026-04-04 00:19 by 猪会飞
[考研] 求调剂 +8 akdhjs 2026-04-03 8/400 2026-04-03 18:17 by 戴维ING
[考研] 0705理学294求调剂 +3 成果成果cg5 2026-04-03 3/150 2026-04-03 14:04 by simons1972
[考研] 一志愿华东理工大学,080500学硕,317分,求调剂 +13 s1145 2026-03-31 15/750 2026-04-03 11:44 by msi123
[考研] 286求调剂 +7 Faune 2026-03-30 7/350 2026-04-03 10:14 by linyelide
[考研] 354求调剂 +4 lxb598 2026-03-31 5/250 2026-04-02 09:55 by Jaylen.
[考研] 085602化学工程268分蹲调剂 +8 月照花林。 2026-04-01 8/400 2026-04-01 22:08 by 无际的草原
[考研] 江苏科技大学招材料研究生 +4 Su032713. 2026-04-01 5/250 2026-04-01 22:03 by cccchenso
[考研] 286求调剂 +5 Sa67890. 2026-04-01 7/350 2026-04-01 19:50 by 6781022
[考研] 材料调剂 +11 一样YWY 2026-03-31 11/550 2026-04-01 11:35 by wangjy2002
[考研] 293求调剂 +3 末未mm 2026-03-30 5/250 2026-03-30 17:23 by 王保杰33
信息提示
请填处理意见