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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酵母氨基酸营养缺陷型的验证问题
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rainbow8

新虫 (小有名气)

[交流] 酵母氨基酸营养缺陷型的验证问题

大家好，我做ura缺陷的酵母菌，该酵母Leu ura合成的基因被敲掉了，ura导入质粒后，在ura缺陷的平板上长出来单菌落，挑单菌落放液体培养验证，培养基同样是缺ura的，对照设既不加ura也不加leu，结果是不加ura的管生长，不加leu和ura的不长（同一个单菌落），这能证明质粒已经成功转到酵母里面了吗？还有必要再提酵母质粒或基因组或pcr验证吗？请大家帮我分析分析，谢谢！
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1楼 2012-09-27 13:40:59
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blackdogzmz

木虫 (职业作家)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
不懂,帮顶一下,请别人来答吧.....
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2楼2012-09-27 14:26:43
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dshlove

木虫 (正式写手)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
既然是ura缺陷的酵母菌，为什么在ura缺陷的平板上长出来单菌落？
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3楼2012-09-27 16:45:17
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houchm0927

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-09-28 14:40:40
做过Y2H。个人感觉这样就可以了。我做的话，用未转化yeast用单缺-ura不生长，转化yeast用单缺-ura生长。就可以了。我当时做的时候转化结果会用菌液pcr检测的，结果证明可以。其实，看一下单缺板上酵母的形态良好基本上就是转化成功菌株。个人意见！
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4楼2012-09-27 20:50:49
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susizheng

木虫 (著名写手)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
如果你确定用的是Drop-out medium，应该是没有什么问题的，缺陷型筛选是比较准确的，相对抗性筛选来说。
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6楼2012-09-28 09:24:36
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daisy143

至尊木虫 (职业作家)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
帮顶
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7楼2012-09-28 09:54:16
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wt3532

木虫 (著名写手)
★
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
不知道你的酵母是不是二倍体的，如果是 还要先分离单倍体
理论上讲 对照应该都不长才对啊
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8楼2012-09-29 08:48:33
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yingying15885楼
2012-09-27 21:10   回复  
rainbow8(金币+1): 谢谢参与
祝福~
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