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erluoshi

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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
scelab(金币+9, MicEPI+1): xxrxjl o~ 2011-08-19 00:12:56
引用回帖:
2楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-08-17 16:12:25:
活性炭吸附,离心去除活性炭

活性炭品牌不同,孔径也不同,吸附的物质大小也不同,但是很多厂家都不在外包装上标明的。

我曾经使用过几种活性炭来吸附我的粗酶液中的色素,但是效果都不算太好,酶活力会有损失。吸附时间久了,会把酶也吸附,我试过吸附10分钟和过夜的,结果过夜的酶损失稍大。

由于色素不重,所以加2%(W/V)处理,结果有一种活性炭可以去除一半色素,酶损失5%。由于活性炭也会占体积,所以如果用量太大,吸附的蛋白质会更多,所以别加太多。

由于活性炭不能经由离心完全去除,会造成OD600提高,所以从图中可以看出有的处理是OD600比原来酶液还高的。离心后用滤膜过滤,能把活性炭颗粒除去,OD600就会进一步下降。

我的对照为“原酶液不添加活性炭”,使用的活性炭分别为“粒状(天津市北长方正试剂厂,500g)”、“汕头市达濠精细化学品,500g”、“广东省台山市化工厂,500g,批号20080501”、“糖用活性炭”,如果你能买得到多个品种的活性炭,不妨也做一下我的这个实验。





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12楼2011-08-18 23:53:26
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

活性炭吸附,离心去除活性炭
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2楼2011-08-17 16:12:25
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

活性碳也吸蛋白的吧!!建议你用超滤的方法吧,可以同时置换缓冲液和浓缩
3楼2011-08-17 22:46:40
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

引用回帖:
3楼: Originally posted by ganchao1776 at 2011-08-17 22:46:40:
活性碳也吸蛋白的吧!!建议你用超滤的方法吧,可以同时置换缓冲液和浓缩

活性炭确实也吸附蛋白质的,但很多方法都会造成蛋白质的损失,另外,楼主说的是“细胞外产物”,不知道是蛋白质还是什么东西,要是分子量比较小,你的超滤就不起作用了。
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4楼2011-08-18 00:15:50
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ganchao1776

至尊木虫 (职业作家)

引用回帖:
4楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-08-18 00:15:50:
活性炭确实也吸附蛋白质的,但很多方法都会造成蛋白质的损失,另外,楼主说的是“细胞外产物”,不知道是蛋白质还是什么东西,要是分子量比较小,你的超滤就不起作用了。

你说的很有道理,不过我觉的楼主是在做蛋白表达,你再问问楼主是在做什么吧?
5楼2011-08-18 00:21:36
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erluoshi

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6楼2011-08-18 10:46:32
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erluoshi

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7楼2011-08-18 10:47:41
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erluoshi

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8楼2011-08-18 10:48:34
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erluoshi

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9楼2011-08-18 10:49:22
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

【答案】应助回帖

蛋白过过分子筛么?可以试试,我们实验室一个师妹酵母胞外酶表达和你的情况类似,不过在最后一步分子筛的时候色素去除了。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
10楼2011-08-18 11:33:21
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