应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 组氨酸标签的问题
281/3返回列表123下一页
查看: 3097  |  回复: 27
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

761429495

新虫 (小有名气)

[求助] 组氨酸标签的问题 已有1人参与

亲，怎样验证组氨酸标签有没有加到目的基因上，初学者 ，求指导
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
每一个让你讨厌的现在，都有一个不努力的曾经。
1楼 2012-08-19 21:06:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alarace

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
将连好的质粒送公司测序就可以知道是否连上标签了
赞一下 回复此楼
2楼2012-08-19 21:10:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

761429495

新虫 (小有名气)
谁能给我说说从目的基因开始加组氨酸标签开始一直到粗酶液的获得大体有哪些步骤啊
赞一下 回复此楼
每一个让你讨厌的现在，都有一个不努力的曾经。
3楼2012-08-19 21:16:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
3楼: Originally posted by 761429495 at 2012-08-19 21:16:32
谁能给我说说从目的基因开始加组氨酸标签开始一直到粗酶液的获得大体有哪些步骤啊

粗酶液是什么？我们还不知道你的基因是干嘛的呢，说详细点，不然帮不上。
赞一下 回复此楼
4楼2012-08-20 14:31:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

761429495

新虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dshlove at 2012-08-20 14:31:12
粗酶液是什么？我们还不知道你的基因是干嘛的呢，说详细点，不然帮不上。...

意思就是我的木聚糖酶基因现在已经在毕赤酵母里面表达了，接下来的工作就是通过给这个基因的C端加组氨酸标签，然后用镍柱亲和层析纯化这个酶蛋白。引物该如何让设计，大概主要步骤有哪些？
赞一下 回复此楼
每一个让你讨厌的现在，都有一个不努力的曾经。
5楼2012-08-20 14:38:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by 761429495 at 2012-08-20 14:38:39
意思就是我的木聚糖酶基因现在已经在毕赤酵母里面表达了，接下来的工作就是通过给这个基因的C端加组氨酸标签，然后用镍柱亲和层析纯化这个酶蛋白。引物该如何让设计，大概主要步骤有哪些？...

你当初是怎么把基因弄进去的啊？
现在，你就在基因的3'端（纠正你一点，只有氨基酸才能叫N端C端的）加上组氨酸标签，把组氨酸标签的基因一同视为你的蛋白基因，再设计引物就行了啊。
赞一下 回复此楼
6楼2012-08-20 14:45:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

761429495

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by dshlove at 2012-08-20 14:45:04
你当初是怎么把基因弄进去的啊？
现在，你就在基因的3'端（纠正你一点，只有氨基酸才能叫N端C端的）加上组氨酸标签，把组氨酸标签的基因一同视为你的蛋白基因，再设计引物就行了啊。...

哦 ，嘿嘿 ，也就是说在下游引物的3'端加标签吗? 基因转化进去的啊
赞一下 回复此楼
每一个让你讨厌的现在，都有一个不努力的曾经。
7楼2012-08-20 14:56:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
7楼: Originally posted by 761429495 at 2012-08-20 14:56:50
哦 ，嘿嘿 ，也就是说在下游引物的3'端加标签吗? 基因转化进去的啊...

那你得重新构建了啊。
当初就应该想到把标签加上去的，不然后续纯化很费劲的。
下游引物的5‘加上标签，不是3'哦，方向不能弄反了。因为你是在羧基端加组氨酸标签的，而下游引物也是按照5’--3‘的顺序去设计的，所以，你要加上反向互补的组氨酸标签在下游引物的5’端。
赞一下 回复此楼
8楼2012-08-20 15:32:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

761429495

新虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by dshlove at 2012-08-20 15:32:22
那你得重新构建了啊。
当初就应该想到把标签加上去的，不然后续纯化很费劲的。
下游引物的5‘加上标签，不是3'哦，方向不能弄反了。因为你是在羧基端加组氨酸标签的，而下游引物也是按照5’--3‘的顺序去设计的， ...

亲，我是接别人的课题做，初学者，什么都不懂，谢谢你的指导哦
赞一下 回复此楼
每一个让你讨厌的现在，都有一个不努力的曾经。
9楼2012-08-20 21:11:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

761429495

新虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by alarace at 2012-08-19 21:10:45
将连好的质粒送公司测序就可以知道是否连上标签了

嘿嘿 谢谢
回复此楼
每一个让你讨厌的现在，都有一个不努力的曾经。
10楼2012-08-20 21:12:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 761429495 的主题更新
281/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 309求调剂 +4 花与叶@ 2026-03-10 4/200 2026-03-14 21:26 by a不易
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[考研] 267一志愿南京工业大学0817化工求调剂 +5 SUICHILD 2026-03-12 5/250 2026-03-14 14:53 by jean5056
[考研] 化学工程321分求调剂（南京工业，浙江工业） +3 大米饭！ 2026-03-09 4/200 2026-03-14 02:34 by JourneyLucky
[考研] 求调剂 +3 清风问长安 2026-03-09 3/150 2026-03-14 02:15 by JourneyLucky
[考研] 271求调剂 +10 生如夏花… 2026-03-11 10/500 2026-03-14 00:35 by 卖报员小雨
[考研] 327求调剂 +4 Ffff03 2026-03-10 4/200 2026-03-14 00:17 by JourneyLucky
[考研] 0805，333求调剂 +3 112253525 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:42 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕288分求调剂 一志愿211 +4 在家想你 2026-03-11 4/200 2026-03-13 22:49 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +4 咪咪空空 2026-03-11 4/200 2026-03-13 19:57 by JourneyLucky
[考研] 求b区学校调剂 +3 周56 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:20 by JourneyLucky
[考研] 314求调剂 +7 无懈可击的巨人 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 285求调剂 +4 ytter 2026-03-12 4/200 2026-03-13 14:48 by jxchenghu
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
[考研] 大连大学化学专业研究生调剂 +3 琪久. 2026-03-10 8/400 2026-03-11 10:02 by 琪久.
[考博] 26申博求助 +3 跳跃饼干 2026-03-10 4/200 2026-03-10 21:15 by Tntcnn
[考研] 085602化工求调剂 +7 董boxing 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:07 by BruceLiu320
[考研] 0703化学调剂 +3 三dd. 2026-03-10 3/150 2026-03-10 15:45 by peike
[硕博家园] 木虫好像不热闹了，是不是？ +4 偏振片 2026-03-10 4/200 2026-03-10 09:51 by longwave
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭