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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 组氨酸标签的问题
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761429495

新虫 (小有名气)
引用回帖:
20楼: Originally posted by dshlove at 2012-08-21 16:33:20
前面的步骤没必要，你验证加上去之后，不还要切下来再连到9K上，费那劲，还不如你直接在9K上连接。
给你个大致步骤：
多提点9K的质粒，也用双酶切处理，做载体。你的PCR产物酶切之后，直接用T4连接酶往载体上连接 ...

如果这样的话在给引物加组氨酸标签序列的同时就要加上酶切位点和保护碱基，这样引物是不是太长了啊
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每一个让你讨厌的现在，都有一个不努力的曾经。
21楼2012-08-21 16:50:36
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dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
21楼: Originally posted by 761429495 at 2012-08-21 16:50:36
如果这样的话在给引物加组氨酸标签序列的同时就要加上酶切位点和保护碱基，这样引物是不是太长了啊...

我自己做的时候，设计的引物60多碱基呢。没办法其他的太费时间了。
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22楼2012-08-21 17:01:47
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王礼鹏

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
你表达的蛋白是不是已经加了组氨酸标签？如果是的话，做个WB或anti-his的抗体检查就可以判断标签是否表达，当然也可以判断是否加到目的基因上。祝实验顺利。。。。
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23楼2012-08-22 09:16:43
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lela

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我想知道毕赤酵母表达出来的目的蛋白是与载体连接在一起的，还是只有目的蛋白啊
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24楼2012-12-12 12:59:09
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lela

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

含有组氨酸标签的目的蛋白的纯化到底组氨酸标签是在载体上，还是在目的蛋白上啊啊，纯化的那个到底是单一目的蛋白，还是连接在载体上的蛋白啊
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25楼2012-12-12 13:01:09
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zhangyang16

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by dshlove at 2012-08-20 14:31:12
粗酶液是什么？我们还不知道你的基因是干嘛的呢，说详细点，不然帮不上。...

你们说的这个我很感兴趣，我还有个问题就是组氨酸标签加在N端好还是C端好呢？
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26楼2015-07-07 22:32:26
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zhangyang16

新虫 (初入文坛)
加在N端和C端有什么区别没？哪个更好
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27楼2015-07-07 22:35:28
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hajierlove

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

我也想问问两端的his标签哪个更好

[ 发自小木虫客户端 ]
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踏实
28楼2015-07-08 00:10:56
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