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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 带GST标签的融合蛋白的纯化问题——急急急
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cafe大西瓜

新虫 (初入文坛)

[求助] 带GST标签的融合蛋白的纯化问题——急急急 已有1人参与

请教各位高人们：我表达了一个带GST标签的融合蛋白，原核表达在上清中，可用GST纯化柱进行纯化时，就是结合不上去，蛋白全部都跑到第一流出液中去了，高人们给分析一下是什么原因呢，在此先谢谢各位了，期待大家的回复哦。。。。。。。。
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1楼 2012-04-14 10:41:50
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gaolandragon

金虫 (正式写手)
很多原因吧，蛋白自身表达的情况，你柱子的使用状态等等，愚见，仅供参考
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Never_regret.If_it's_good,it's_wonderful.If_it's_bad,it's_experience.
2楼2012-04-14 10:56:33
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zh10008100

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励应助 2012-04-14 13:40:51
GST标签，不挂柱也是有可能的哦，建议换其他的试试，或者自己改造载体在GST前面加上HIS-TAG，过完Ni柱，纯化出来在切掉GST也行的。
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3楼2012-04-14 13:07:55
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水一315

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-17 19:19:55
有些蛋白可能不是分泌蛋白，不会在菌液上清里。我猜。你可以把菌体超声破碎，用裂解液裂解一下试试。
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What ever is worth doing is worth doing well.
4楼2012-04-17 16:15:37
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张晓彩

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

我现在也在纯化蛋白  开始也是挂不到柱子上  是不是你的超声条件太过剧烈了啊  一定要水浴超声 并且超声完管壁不能发热 也不能发泡  否则GSH失活  无法结合到柱子上
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5楼2014-07-12 17:03:26
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