应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » GST融合蛋白纯化求助 ！！！
201/2返回列表12下一页
查看: 3385  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

alfred023

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-05-31 10:26:13
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

天涯萧客

金虫 (正式写手)

放羊大叔

【答案】应助回帖

直接买 beads GSH的
赞一下 回复此楼
100年后地球照样转
2楼2011-05-31 11:16:54
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张力民1598

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果你很确定你的蛋白有表达的话，从你描述的情况看肯定是没结合上去，你要确定你的buffer没有问题。
赞一下 回复此楼
3楼2011-05-31 11:19:53
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alfred023

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
4楼2011-05-31 11:39:32
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alfred023

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
5楼2011-05-31 11:40:12
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

deblway

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

建议检查下所用的Lysis buffer，如果标签和填料没有问题的话,很有可能是lysis buffer使得融合蛋白不与GSH结合。。。。附上配方。。
        Lysis buffer （50ml）
1)         2.5ml 1 M Tris，pH8.0
2)         0.1ml 0.5ml EDTA
3)         0.292g NaCl
4)         0.5ml Triton X-100
5)         0.25ml 1M DTT
u         Elution buffer
1)         0.615g glutathione
2)         10 ml 1M Tris，pH8.0
3)         90ml distilled water
赞一下 回复此楼
海贼王！哥当定了。。。。
6楼2011-05-31 14:45:12
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可能的原因有很多呢，做实验有对照才好找问题，如果你同学做的也是GST标记的蛋白的话，他就是最好的对照，你把他用的bead要过来做一下你的蛋白试试。buffer都是照着配，错的可能性不大，相比之下bead出问题的可能性更大些、
赞一下 回复此楼
摒气动方息，宁神心自明。
7楼2011-05-31 14:55:06
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alfred023

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
8楼2011-05-31 15:10:51
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alfred023

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
9楼2011-05-31 15:39:52
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

deblway

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

实际上Lysis buffer的用处主要是防止非目的蛋白的非特异性结合用的，例如在HIS TAG亲和层析过程中的Lysis Buffer中是含有少量的咪唑浓度的，而Elution buffer
中咪唑浓度会高些！我们才用Lysis buffer进行菌体的悬浮。。个人认为DTT与巯基乙醇作用应该是一样的。。应该可以替换。。但应该准确控制浓度的问题。。如果过高的话，会改变你本身蛋白的一些性质和填料的一些性质。。按照你说的你与同学做的过程一样，是否连试剂用的都一样捏。。如果都一样的话，呵呵可能就是不BUFFER出的问题了。。那就的从你插入片段入手咯。。那就是本身蛋白出了问题了。。只是个人的一个看法。。。具体问题和过程还是您最清楚。。
赞一下 回复此楼
海贼王！哥当定了。。。。
10楼2011-05-31 18:03:01
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 alfred023 的主题更新
201/2返回列表12下一页
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 本人考085602 化学工程 专硕 +8 不知道叫什么！ 2026-03-15 9/450 2026-03-16 07:45 by L135790
[教师之家] 焦虑 +6 水冰月月野兔 2026-03-13 8/400 2026-03-16 06:39 by lfq_198989
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 294求调剂 +3 Zys010410@ 2026-03-13 4/200 2026-03-15 10:59 by zhq0425
[考研] 080500，材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 290求调剂 +4 @将就将就看 2026-03-10 8/400 2026-03-14 14:23 by 千千运气
[考研] 材料工程,326分，求调剂 +6 KRSLSR 2026-03-10 6/300 2026-03-13 23:47 by JourneyLucky
[考研] 341求调剂 +3 番茄头--- 2026-03-10 3/150 2026-03-13 23:07 by JourneyLucky
[考研] 337一志愿华南理工0805材料求调剂 +7 mysdl 2026-03-11 9/450 2026-03-13 22:43 by JourneyLucky
[考研] 泣血叩求调剂恩，愿以丹心报师恩 +6 Iuruoh 2026-03-11 6/300 2026-03-13 22:06 by JourneyLucky
[考研] 281求调剂 +9 Koxui 2026-03-12 11/550 2026-03-13 20:50 by Koxui
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 310求调剂 +3 【上上签】 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:16 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-12 3/150 2026-03-13 14:30 by 求调剂zz
[考研] 材料调剂，307分 +13 张泳铭1 2026-03-09 17/850 2026-03-13 11:09 by 薛云鹏
[考研] 296求调剂 +3 大口吃饭 身体健 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:31 by 学员8dgXkO
[考博] 26读博 +4 Rui135246 2026-03-12 10/500 2026-03-13 07:15 by gaobiao
[考研] 341求调剂 +4 捣蛋猪猪 2026-03-11 4/200 2026-03-12 14:47 by ruiyingmiao
[考研] 293求调剂，一志愿陕师大生物学 +3 ??????.?.??? 2026-03-09 3/150 2026-03-11 10:02 by 学员8dgXkO
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭