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alfred023

禁虫 (初入文坛)

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天涯萧客

金虫 (正式写手)

放羊大叔

【答案】应助回帖

直接买 beads GSH的
100年后地球照样转
2楼2011-05-31 11:16:54
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张力民1598

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

如果你很确定你的蛋白有表达的话,从你描述的情况看肯定是没结合上去,你要确定你的buffer没有问题。
3楼2011-05-31 11:19:53
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alfred023

禁虫 (初入文坛)

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4楼2011-05-31 11:39:32
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alfred023

禁虫 (初入文坛)

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5楼2011-05-31 11:40:12
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deblway

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

建议检查下所用的Lysis buffer,如果标签和填料没有问题的话,很有可能是lysis buffer使得融合蛋白不与GSH结合。。。。附上配方。。
        Lysis buffer (50ml)
1)         2.5ml 1 M Tris,pH8.0
2)         0.1ml 0.5ml EDTA
3)         0.292g NaCl
4)         0.5ml Triton X-100
5)         0.25ml 1M DTT
u         Elution buffer
1)         0.615g glutathione
2)         10 ml 1M Tris,pH8.0
3)         90ml distilled water
海贼王!哥当定了。。。。
6楼2011-05-31 14:45:12
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terry130

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

可能的原因有很多呢,做实验有对照才好找问题,如果你同学做的也是GST标记的蛋白的话,他就是最好的对照,你把他用的bead要过来做一下你的蛋白试试。buffer都是照着配,错的可能性不大,相比之下bead出问题的可能性更大些、
摒气动方息,宁神心自明。
7楼2011-05-31 14:55:06
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alfred023

禁虫 (初入文坛)

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8楼2011-05-31 15:10:51
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alfred023

禁虫 (初入文坛)

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9楼2011-05-31 15:39:52
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deblway

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

实际上Lysis buffer的用处主要是防止非目的蛋白的非特异性结合用的,例如在HIS TAG亲和层析过程中的Lysis Buffer中是含有少量的咪唑浓度的,而Elution buffer
中咪唑浓度会高些!我们才用Lysis buffer进行菌体的悬浮。。个人认为DTT与巯基乙醇作用应该是一样的。。应该可以替换。。但应该准确控制浓度的问题。。如果过高的话,会改变你本身蛋白的一些性质和填料的一些性质。。按照你说的你与同学做的过程一样,是否连试剂用的都一样捏。。如果都一样的话,呵呵可能就是不BUFFER出的问题了。。那就的从你插入片段入手咯。。那就是本身蛋白出了问题了。。只是个人的一个看法。。。具体问题和过程还是您最清楚。。
海贼王!哥当定了。。。。
10楼2011-05-31 18:03:01
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