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1楼 2011-05-31 10:26:13

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deblway

铜虫 (初入文坛)

BioEPI: 3
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性别: GG
专业: 生物化学

【答案】应助回帖

建议检查下所用的Lysis buffer，如果标签和填料没有问题的话,很有可能是lysis buffer使得融合蛋白不与GSH结合。。。。附上配方。。
      Lysis buffer （50ml）
1)       2.5ml 1 M Tris，pH8.0
2)       0.1ml 0.5ml EDTA
3)       0.292g NaCl
4)       0.5ml Triton X-100
5)       0.25ml 1M DTT
u       Elution buffer
1)       0.615g glutathione
2)       10 ml 1M Tris，pH8.0
3)       90ml distilled water

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海贼王！哥当定了。。。。

6楼2011-05-31 14:45:12

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deblway

铜虫 (初入文坛)

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【答案】应助回帖

实际上Lysis buffer的用处主要是防止非目的蛋白的非特异性结合用的，例如在HIS TAG亲和层析过程中的Lysis Buffer中是含有少量的咪唑浓度的，而Elution buffer
中咪唑浓度会高些！我们才用Lysis buffer进行菌体的悬浮。。个人认为DTT与巯基乙醇作用应该是一样的。。应该可以替换。。但应该准确控制浓度的问题。。如果过高的话，会改变你本身蛋白的一些性质和填料的一些性质。。按照你说的你与同学做的过程一样，是否连试剂用的都一样捏。。如果都一样的话，呵呵可能就是不BUFFER出的问题了。。那就的从你插入片段入手咯。。那就是本身蛋白出了问题了。。只是个人的一个看法。。。具体问题和过程还是您最清楚。。

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海贼王！哥当定了。。。。

10楼2011-05-31 18:03:01

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