24小时热门版块排行榜    

查看: 3179  |  回复: 13

chunmeiyang

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】凝血酶切割GST-tag 求助! 已有9人参与

我纯化出带GST标签的融合蛋白,用凝血酶切割后,蛋白是跟GST分开了,但蛋白都沉淀了,请问一下,这是怎么回事啊,大家有没有谁做过?有没有遇到过此类问题啊?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)

buffer可能不合适,考虑更换buffer

或者就不要切了
2楼2010-08-24 18:12:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chunmeiyang

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-08-24 18:12:56:
buffer可能不合适,考虑更换buffer

或者就不要切了

我这个必须切,要不然会对酶活有影响的,我用的buffer是PBS,应该不会使蛋白沉淀吧
3楼2010-08-24 18:46:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
看看 从纯化到星辰 ,上面有对buffer说明的地方
4楼2010-08-25 11:14:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chunmeiyang

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-08-25 11:14:43:
看看 从纯化到星辰 ,上面有对buffer说明的地方

请问什么叫“从纯化到星辰”?
5楼2010-08-25 16:40:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by chunmeiyang at 2010-08-25 16:40:52:

请问什么叫“从纯化到星辰”?

百度  Google都可以,马上看到答案
6楼2010-08-25 17:06:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by chunmeiyang at 2010-08-25 16:40:52:

请问什么叫“从纯化到星辰”?

牛人的经典纯化文章啊,

具体你用的酶切条件是什么?
7楼2010-08-25 17:40:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chunmeiyang

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-08-25 17:40:59:


牛人的经典纯化文章啊,

具体你用的酶切条件是什么?

让带GST标签的融合蛋白先接到柱子上,然后取出树脂,加入凝血酶溶液(40ul凝血酶+960ulPBS), 22度于摇床轻轻摇动16小时
8楼2010-08-26 11:15:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

2009227004

金虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by chunmeiyang at 2010-08-26 11:15:53:
让带GST标签的融合蛋白先接到柱子上,然后取出树脂,加入凝血酶溶液(40ul凝血酶+960ulPBS), 22度于摇床轻轻摇动16小时

你好,请问一下,你这个加入的凝血酶的浓度或者是酶活单位是怎么算的。还有,如果表达的蛋白在22度容易变性怎么办?

[ Last edited by 2009227004 on 2011-5-8 at 12:17 ]
当别人都在假装正经的时候,我就假装不正经。
9楼2011-05-08 12:15:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王会征

铁杆木虫 (著名写手)


小木虫(金币+0.5): 给个红包,谢谢回帖
沉淀也算正常啊,GST有增溶作用啊
10楼2012-03-12 21:33:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 chunmeiyang 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 售SCI一区文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-16 22:26 by Tql5LQhh5rLK
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 4/200 2026-09-16 22:16 by Tql5LQhh5rLK
[考研] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 23jxep3nCNZb 2026-09-14 3/150 2026-09-16 20:50 by MHf40yA0Uhyb
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-16 19:15 by rRvxEj3zorCy
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 6/300 2026-09-16 17:27 by i3KBRD19ERkG
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-16 17:12 by i3KBRD19ERkG
[考博] 售SCI-T0P文章,我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 4/200 2026-09-16 17:00 by i3KBRD19ERkG
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 6/300 2026-09-16 16:15 by i3KBRD19ERkG
[博后之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-16 16:12 by i3KBRD19ERkG
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 vZfe6xYu34yj 2026-09-14 3/150 2026-09-16 08:51 by SjQobnC04j06
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 5/250 2026-09-16 04:51 by LH5NkK5Ud4bh
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-16 04:27 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 售SCI一区T0P文章,我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-16 02:50 by DgNGHc3h5tPl
[考研] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 20:14 by zNcEhTcH7ihq
[公派出国] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:59 by CgyNCDVNhGVg
[找工作] 售SCI一区T0P文章,我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:39 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +7 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 7/350 2026-09-15 16:23 by CgyNCDVNhGVg
[教师之家] 售SCI一区文章,我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:46 by C79jjtjAKjEn
[博后之家] 售SCI一区T0P文章,我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:50 by 5BDX0d0WFp7t
[基金申请] 求教各位大神:2026教育部人文社科青年基金项目何时公示呀? +5 云宴山人 2026-09-10 7/350 2026-09-14 12:11 by ecnu2013
信息提示
请填处理意见