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chunmeiyang

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】凝血酶切割GST-tag 求助!已有9人参与

我纯化出带GST标签的融合蛋白,用凝血酶切割后,蛋白是跟GST分开了,但蛋白都沉淀了,请问一下,这是怎么回事啊,大家有没有谁做过?有没有遇到过此类问题啊?
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月月大可

木虫 (著名写手)

buffer可能不合适,考虑更换buffer

或者就不要切了
2楼2010-08-24 18:12:56
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chunmeiyang

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-08-24 18:12:56:
buffer可能不合适,考虑更换buffer

或者就不要切了

我这个必须切,要不然会对酶活有影响的,我用的buffer是PBS,应该不会使蛋白沉淀吧
3楼2010-08-24 18:46:32
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月月大可

木虫 (著名写手)


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看看 从纯化到星辰 ,上面有对buffer说明的地方
4楼2010-08-25 11:14:43
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chunmeiyang

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-08-25 11:14:43:
看看 从纯化到星辰 ,上面有对buffer说明的地方

请问什么叫“从纯化到星辰”?
5楼2010-08-25 16:40:52
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月月大可

木虫 (著名写手)


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引用回帖:
Originally posted by chunmeiyang at 2010-08-25 16:40:52:

请问什么叫“从纯化到星辰”?

百度  Google都可以,马上看到答案
6楼2010-08-25 17:06:28
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jasco

木虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by chunmeiyang at 2010-08-25 16:40:52:

请问什么叫“从纯化到星辰”?

牛人的经典纯化文章啊,

具体你用的酶切条件是什么?
7楼2010-08-25 17:40:59
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chunmeiyang

银虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-08-25 17:40:59:


牛人的经典纯化文章啊,

具体你用的酶切条件是什么?

让带GST标签的融合蛋白先接到柱子上,然后取出树脂,加入凝血酶溶液(40ul凝血酶+960ulPBS), 22度于摇床轻轻摇动16小时
8楼2010-08-26 11:15:53
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2009227004

金虫 (正式写手)


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引用回帖:
Originally posted by chunmeiyang at 2010-08-26 11:15:53:
让带GST标签的融合蛋白先接到柱子上,然后取出树脂,加入凝血酶溶液(40ul凝血酶+960ulPBS), 22度于摇床轻轻摇动16小时

你好,请问一下,你这个加入的凝血酶的浓度或者是酶活单位是怎么算的。还有,如果表达的蛋白在22度容易变性怎么办?

[ Last edited by 2009227004 on 2011-5-8 at 12:17 ]
当别人都在假装正经的时候,我就假装不正经。
9楼2011-05-08 12:15:44
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)


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沉淀也算正常啊,GST有增溶作用啊
10楼2012-03-12 21:33:30
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