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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】凝血酶切割GST-tag 求助！
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chunmeiyang

银虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】凝血酶切割GST-tag 求助！ 已有9人参与

我纯化出带GST标签的融合蛋白，用凝血酶切割后，蛋白是跟GST分开了，但蛋白都沉淀了，请问一下，这是怎么回事啊，大家有没有谁做过？有没有遇到过此类问题啊？
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1楼 2010-08-24 10:33:34
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月月大可

木虫 (著名写手)
buffer可能不合适，考虑更换buffer

或者就不要切了
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2楼2010-08-24 18:12:56
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chunmeiyang

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-08-24 18:12:56:
buffer可能不合适，考虑更换buffer

或者就不要切了

我这个必须切，要不然会对酶活有影响的，我用的buffer是PBS，应该不会使蛋白沉淀吧
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3楼2010-08-24 18:46:32
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月月大可

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看看 从纯化到星辰 ，上面有对buffer说明的地方
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4楼2010-08-25 11:14:43
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chunmeiyang

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-08-25 11:14:43:
看看 从纯化到星辰 ，上面有对buffer说明的地方

请问什么叫“从纯化到星辰”？
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5楼2010-08-25 16:40:52
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月月大可

木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by chunmeiyang at 2010-08-25 16:40:52:

请问什么叫“从纯化到星辰”？

百度  Google都可以，马上看到答案
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6楼2010-08-25 17:06:28
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jasco

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by chunmeiyang at 2010-08-25 16:40:52:

请问什么叫“从纯化到星辰”？

牛人的经典纯化文章啊，

具体你用的酶切条件是什么？
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7楼2010-08-25 17:40:59
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chunmeiyang

银虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by jasco at 2010-08-25 17:40:59:


牛人的经典纯化文章啊，

具体你用的酶切条件是什么？

让带GST标签的融合蛋白先接到柱子上，然后取出树脂，加入凝血酶溶液（40ul凝血酶+960ulPBS）, 22度于摇床轻轻摇动16小时
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8楼2010-08-26 11:15:53
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2009227004

金虫 (正式写手)
★
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引用回帖:
Originally posted by chunmeiyang at 2010-08-26 11:15:53:
让带GST标签的融合蛋白先接到柱子上，然后取出树脂，加入凝血酶溶液（40ul凝血酶+960ulPBS）, 22度于摇床轻轻摇动16小时

你好，请问一下，你这个加入的凝血酶的浓度或者是酶活单位是怎么算的。还有，如果表达的蛋白在22度容易变性怎么办？

[ Last edited by 2009227004 on 2011-5-8 at 12:17 ]
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当别人都在假装正经的时候，我就假装不正经。
9楼2011-05-08 12:15:44
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)
★
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沉淀也算正常啊，GST有增溶作用啊
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10楼2012-03-12 21:33:30
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