应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大肠杆菌中蛋白表达量偏低，大家有什么建议？
291/3返回列表123下一页
查看: 4165  |  回复: 28
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

月月大可

木虫 (著名写手)

[交流] 【求助/交流】大肠杆菌中蛋白表达量偏低，大家有什么建议？ 已有9人参与

一直在做蛋白的原核表达与纯化，目前遇到的一个蛋白表达量偏低，不知道大家有何建议？

构建在pET28a载体上，170AA。稀有密码子分析显示个数很少，没有连续串联出现；同源度77%（氨基酸）功能相同的另一蛋白表达量却大的惊人；一般都是培养至OD在1.6-2.0左右加入1mM IPTG  37℃下诱导4h。蛋白完全上清表达，具有极高的稳定性（可以使用沸水浴破菌，依然有活性）。尝试过使用Rosetta（DE3）菌株，无明显效果。

疑问：
1、更换载体是否有可能对蛋白的表达量产生极大的影响？
2、加入融合蛋白（MBP GST等）会不会明显提高蛋白表达量？
3、是否还有其他提高蛋白表达产量的建议？
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白表达纯化与检测

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

恶魔的左眼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2010-08-19 23:19:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

bunny0512

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
月月大可(金币+1):谢谢 你师姐很执着 2010-08-21 18:35:42
1、更换载体是否有可能对蛋白的表达量产生极大的影响？
      应该是有影响的，比如我用GST带我的目的基因，蛋白量几乎没有
      换了带strep标签的质粒就有少量表达，不过不好纯化

2、加入融合蛋白（MBP GST等）会不会明显提高蛋白表达量？
      如上所述，用GST标签后纯化的另一个蛋白，表达量很好，也很纯

3、是否还有其他提高蛋白表达产量的建议？
      本人懂的也不多，我一个师姐曾经为了表达一个蛋白换了十几种载体，最后表达出来了，有的时候真的需要运气。
赞一下(2人) 回复此楼
在哪里~在哪里见过你~
8楼2010-08-21 10:24:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chenyuqin

新虫 (小有名气)
★
月月大可(金币+1):应该没有毒性，同源蛋白表达的很欢 2010-08-29 16:43:38
silicare(金币+1):谢谢交流 2010-08-31 08:33:05
1。尝试换载体，我曾经也有类似问题，后来换了载体就好了；
2。感觉你诱导之前的OD应该0.6-1.0比较好；
3。蛋白是否有毒性。
赞一下(2人) 回复此楼
where there is a will,there ia a way.
18楼2010-08-23 15:19:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

看天

木虫 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
最近生物科学帖子更新很快 要想持续得到回答 得自己顶贴
赞一下(1人) 回复此楼
戒嗔怒以养肝气，省言语以养神气，多读书以养质气，顺时令以养元气，不拘节以养大气，观天变以养灵气，莫强求规于运气。
2楼2010-08-20 14:07:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wordsworth3180

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
月月大可(金币+1):谢谢，正在更换中 2010-08-21 18:34:00
听说换载体有时效果会很明显。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2010-08-20 14:16:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)
我是在考虑换载体，已经发送了新引物


只是感觉这种方法不一定有效，只能尝试了。
赞一下 回复此楼
4楼2010-08-20 17:08:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王家大成

木虫 (正式写手)

囧囧小虫
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
月月大可(金币+1):谢谢 2010-08-21 18:34:15
用融合蛋白的方法还是值得一试
赞一下(1人) 回复此楼
一念起，万水千山；一念灭，沧海桑田！
5楼2010-08-20 18:07:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夜龙舞

金虫 (小有名气)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):鼓励交流 2010-08-20 20:26:38
月月大可(金币+1):预测显示没有信号肽，不过我还是对前面的一段序列很怀疑。 2010-08-21 18:35:14
你构建载体时把信号肽序列去除了么，没有的话分泌到胞外，得率就非常低了。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2010-08-20 18:27:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

月月大可

木虫 (著名写手)
没有信号肽
回复此楼
7楼2010-08-20 21:58:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fjinliu

银虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
月月大可(金币+1):我感觉载体的更换需有明确的目的性 2010-08-21 18:36:33
换载体可行得通，我遇到过同样的问题，换了几个载体才表达出来。
也可以考虑换个菌株！
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2010-08-21 10:34:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

自由飞扬

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
月月大可(金币+1):OD在0.6只是常规培养方法，当溶氧变大的时候OD可以考虑退后 2010-08-21 18:38:21
OD 1.6~2.0才诱导？ 太晚了吧

你换成在 0.6~1.0诱导，表达量估计就上去了
赞一下(1人) 回复此楼
我了个擦，这倒霉ID不是我自己起的不是我自己起的
10楼2010-08-21 10:53:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 月月大可 的主题更新
291/3返回列表123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿085802 323分求调剂 +12 drizzle_9 2026-04-12 13/650 2026-04-13 01:15 by 幸免 ..
[考研] 085404 293求调剂 +9 勇远库爱314 2026-04-06 10/500 2026-04-11 10:36 by 紫曦紫棋
[考研] 农业管理302分求调剂 +3 xuening1 2026-04-10 3/150 2026-04-11 10:18 by zhq0425
[考研] 0854调剂 +8 950824he@ 2026-04-09 8/400 2026-04-11 10:11 by zhq0425
[考研] 22408 327分求调剂 +4 韵风kon 2026-04-10 4/200 2026-04-11 09:51 by 猪会飞
[考研] 298求调剂 +9 钉叮咚冬瓜 2026-04-07 11/550 2026-04-11 09:35 by zhq0425
[考研] 342电子信息专硕求调剂 +9 你让我怎么荔枝 2026-04-10 10/500 2026-04-11 08:33 by zhq0425
[考研] 计算机类求调剂，22408-274分 +7 上岸de小虫 2026-04-09 8/400 2026-04-10 19:56 by fxue1114
[考研] 一志愿矿大，材料工程专硕314分，0856可调都可以 +15 无懈可击的巨人 2026-04-09 15/750 2026-04-10 18:10 by hmn_wj
[考研] 调剂申请086000一志愿西北农林科技大学生物与医药320分-本科齐鲁工业大学 +3 美美女士 2026-04-09 3/150 2026-04-10 10:31 by liuhuiying09
[考研] 一志愿鲁东大学071000生物学学硕初试分数276求调剂 +20 慕绝cc 2026-04-09 24/1200 2026-04-10 10:22 by xujun0624
[考研] 292求调剂 +9 笑笑袁 2026-04-09 9/450 2026-04-10 10:05 by LHGeng
[考研] 材料专硕(0856) 339分求调剂 +9 哈哈哈鹅哈哈哈 2026-04-09 10/500 2026-04-09 20:01 by Orcid
[考研] 284求调剂 +7 让我上岸吧阿西 2026-04-09 7/350 2026-04-09 18:59 by haironglove
[考研] 求调剂材料科学与工程一志愿985初试365分 +5 材化李可 2026-04-08 5/250 2026-04-09 17:00 by Lilly_Li
[考研] 264求调剂 +11 麦小叮当 2026-04-07 11/550 2026-04-08 16:05 by 一只好果子?
[考研] 275 求调剂 +8 Lei812514 2026-04-07 8/400 2026-04-08 12:46 by chemisry
[考研] 304求调剂 +10 素年祭语 2026-04-06 17/850 2026-04-08 09:05 by 蓝云思雨
[考研] 259求调剂 +5 就爱吃土豆呀呀 2026-04-07 5/250 2026-04-07 22:40 by JourneyLucky
[考研] 本科生物信息学，总分362 求07 08调剂 +6 q小倩1210 2026-04-06 6/300 2026-04-07 19:40 by macy2011
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭