【求助/交流】大肠杆菌中蛋白表达量偏低，大家有什么建议？ - 分子生物 - 综合其他

我了个擦，这倒霉ID不是我自己起的不是我自己起的

11楼2010-08-21 10:57:23

muchongchong838

禁虫 (正式写手)

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小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
月月大可(金币+1):这个需要的周期略长了，等不及了 2010-08-21 18:40:03

本帖内容被屏蔽

12楼2010-08-21 11:33:53

月月大可

木虫 (著名写手)

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silicare(金币+1):谢谢交流 2010-08-31 08:29:05

对于OD问题我感觉不是核心问题所在。我所表达的各种蛋白都是在此诱导后。0.8诱导蛋白的产量太少（特别是一些需要低温过夜诱导的）。我需要非常多的蛋白供我纯化后结晶试验。

我正在积极尝试使用MBP融合蛋白，看看把目的蛋白藏在这么大的标签后会不会有明显的效果。

13楼2010-08-21 18:30:37

yingq1

木虫 (小有名气)

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月月大可(金币+1):谢谢 2010-08-22 17:20:56
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-08-31 08:29:26

个人以为提高表达量载体构建很重要，启动子的强弱，要表达基因的大小，载体大小等，一个好的载体对表达很有帮助。我初学表笑话

14楼2010-08-22 12:42:09

sqhnsd

金虫 (正式写手)

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silicare:趁现在还是花老板的钱，赶紧折腾 2010-08-31 08:30:12

引用回帖:

Originally posted by bunny0512 at 2010-08-21 10:24:51:
1、更换载体是否有可能对蛋白的表达量产生极大的影响？
应该是有影响的，比如我用GST带我的目的基因，蛋白量几乎没有
换了带strep标签的质粒就有少量表达，不过不好纯化

2、加入融合蛋白（MBP G ...

你师姐真能折腾，呵呵

15楼2010-08-22 15:21:17

gene001

金虫 (正式写手)

就是个普通教师

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月月大可(金币+2):谢谢 2010-08-29 16:42:57
silicare(金币+1):谢谢参与 2010-08-31 08:30:28

引用回帖:

Originally posted by 月月大可 at 2010-08-19 23:19:23:
一直在做蛋白的原核表达与纯化，目前遇到的一个蛋白表达量偏低，不知道大家有何建议？

构建在pET28a载体上，170AA。稀有密码子分析显示个数很少，没有连续串联出现；同源度77%（氨基酸）功能相同的另一蛋白表达 ...

一、你所说的西游密码子很少，是多少？其中有没有大肠杆菌中非常少见的密码子？要是有还是可以考虑优化一下密码子！
二、表达载体更换是可以考虑的，最好是更换成启动子和pET系列不一样的载体试试！
三、考虑融合表达也是一种策略，但是要考虑融合表达部分会不会影响你蛋白质的活性，要是影响，还得切除融合部分，切除的成本高不高？这个问题对于生产很重要！

大家共同交流、共同提高！！！

16楼2010-08-23 08:51:49