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fppzcz

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
Originally posted by 月月大可 at 2010-08-19 23:19:23:
一直在做蛋白的原核表达与纯化,目前遇到的一个蛋白表达量偏低,不知道大家有何建议?

构建在pET28a载体上,170AA。稀有密码子分析显示个数很少,没有连续串联出现;同源度77%(氨基酸)功能相同的另一蛋白表达 ...

28 是胞内的,怎么上清有表达的呢?奇怪了。。
21楼2010-11-04 15:54:11
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肥宝

金虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
西瓜(金币+3): 鼓励新虫! 2012-01-04 12:37:54
1.你诱导时的OD太高了。
2.降低IPTG的量试试,量太高也影响表达。
3.试试15度诱导过夜,对可溶性蛋白表达比较好。
22楼2012-01-04 10:44:10
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linlingdaiyu

铜虫 (初入文坛)

学习一下
23楼2012-01-04 13:41:53
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flyy1986

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
lZ使用的什么培养基?试试高营养培养基,然后再在OD=2的时候诱导,不知可否?
24楼2012-04-24 16:43:06
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月月大可

木虫 (著名写手)

引用回帖:
2453974楼: Originally posted by flyy1986 at 2012-04-24 16:43:06:
lZ使用的什么培养基?试试高营养培养基,然后再在OD=2的时候诱导,不知可否?

呵呵,感谢回复啊。都毕业一年了,换新课题了

当时使用普通LB
25楼2012-04-24 21:05:56
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淘淘279

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
我的蛋白原核表达后也是量少所以做了两个方面的优化
1,优化密码子
2,更换自诱导培养基(含乳糖和葡萄糖)
两个优化后全细胞PAGE显示蛋白量很大
但同时另一个问题出现了,形成了包涵体
希望对你有帮助
你能做的永远不止这些!
26楼2014-09-10 18:39:24
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谢晨曦

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
引用回帖:
26楼: Originally posted by 淘淘279 at 2014-09-10 18:39:24
我的蛋白原核表达后也是量少所以做了两个方面的优化
1,优化密码子
2,更换自诱导培养基(含乳糖和葡萄糖)
两个优化后全细胞PAGE显示蛋白量很大
但同时另一个问题出现了,形成了包涵体
希望对你有帮助

怎么优化密码子呀
27楼2015-02-03 22:16:50
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曼陀罗的祈祷

金虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
楼主,请教基因串联表达的问题
想做个有趣的人,却在逗比的道路上越走越远~
28楼2015-08-19 16:41:25
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
送红花一朵
原核表达纯化的好帖子,嗯。。。有用,Mark一个
早上一副睡不醒的样子,下午一副没睡醒的样子,晚上一副打了鸡血的样子!
29楼2015-08-20 10:01:09
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