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月月大可木虫 (著名写手)
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[交流]
【求助/交流】大肠杆菌中蛋白表达量偏低，大家有什么建议？ 已有9人参与
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一直在做蛋白的原核表达与纯化，目前遇到的一个蛋白表达量偏低，不知道大家有何建议？ 构建在pET28a载体上，170AA。稀有密码子分析显示个数很少，没有连续串联出现；同源度77%（氨基酸）功能相同的另一蛋白表达量却大的惊人；一般都是培养至OD在1.6-2.0左右加入1mM IPTG 37℃下诱导4h。蛋白完全上清表达，具有极高的稳定性（可以使用沸水浴破菌，依然有活性）。尝试过使用Rosetta（DE3）菌株，无明显效果。 疑问： 1、更换载体是否有可能对蛋白的表达量产生极大的影响？ 2、加入融合蛋白（MBP GST等）会不会明显提高蛋白表达量？ 3、是否还有其他提高蛋白表达产量的建议？ |
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