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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大肠杆菌表达，蛋白可溶但无酶活，如何解决
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xinyaolu

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】大肠杆菌表达，蛋白可溶但无酶活，如何解决 已有9人参与

本人在做一个植物蛋白，100kd，单链，含有两对二硫键，宿主大肠杆菌。蛋白可溶但无酶活。也使用了pET32a和Rosetta-gami 一直是可溶无酶活。请问，怎样处理才能得到活性的蛋白
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1楼 2010-10-21 10:50:07
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fjt198719

木虫 (著名写手)

永远的菜鸟
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+1):是的 2010-10-21 12:26:45
帮不了楼主什么忙，我只知道大肠表达系统的缺点就是可能表达的外源蛋白是没有活性的，因为大肠杆菌不会对目标蛋白进行正确修饰。而芽孢杆菌表达系统就克服了这个缺点，但是芽孢杆菌不好转化。
赞一下(2人) 回复此楼
独YY不如众YY！！！
2楼2010-10-21 11:20:29
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烟大考研

金虫 (正式写手)
建议做包涵体
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心信其可行，则移山填海之难，终有成功之日；心信其不可行，则反掌折枝之易，亦无收效之期
3楼2010-10-21 11:37:16
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zhaocy8903

木虫 (知名作家)
变性后复性
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4楼2010-10-21 11:42:26
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silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主
原核表达有无酶活要靠运气，要不为啥还要做突变筛选呢
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5楼2010-10-21 11:49:14
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leezz

铜虫 (小有名气)

愤青
现在国外都用枯草了。
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6楼2010-10-21 15:09:26
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wdyym

禁言 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
7楼2010-10-21 15:15:13
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Rubisco580

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
引用回帖:
Originally posted by wdyym at 2010-10-21 15:15:13:
真核表达可能会好吧

有道理，原核表达的问题就是折叠不对或者修饰不足，例如糖基化。
试试真核宿主吧。
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2010-10-21 16:38:02
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qingqingcao288

木虫 (小有名气)
同样建议用真核的
赞一下 回复此楼
9楼2010-10-21 17:25:46
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郭高杰

新虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by silicare at 2010-10-21 11:49:14
原核表达有无酶活要靠运气，要不为啥还要做突变筛选呢

突变筛选，怎么做
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10楼2018-11-27 09:30:40
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