| 查看: 1631 | 回复: 5 | |||
xinyaolu木虫 (小有名气)
|
[交流]
【求助/交流】大肠杆菌表达，有蛋白无酶活，如何解决 已有5人参与
|
| 各位大侠，最近在表达一个100KD左右的蛋白，含有两个二硫键，基因中有稀有密码子，使用了pET32a作为载体，同时用Rosetta-gami作为宿主。25℃诱导，IPTG0.8mM.蛋白电泳有非常明显的条带，但是胞内可溶部分未能测到酶活，同时电泳现实胞内可溶部分也有蛋白条带。请问各位高手，如何优化才能实现蛋白的正确折叠，测到酶活，非常感谢 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有248人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 怎样保存大肠杆菌发酵的蛋白酶
已经有2人回复
- 求大肠杆菌 lpp（脂蛋白）启动子的序列~ 谢谢~~~~~在线等
已经有3人回复
- 【求助/交流】蛋白表达，大肠杆菌总是死。。。
已经有27人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌表达，蛋白可溶但无酶活，如何解决
已经有9人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌自身的代谢能给酶提供金属元素吗？
已经有4人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌中蛋白表达量偏低，大家有什么建议？
已经有28人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌表达的目的蛋白没活性，可以考虑换什么表达载体？
已经有7人回复
- 【求助/交流】关于大肠杆菌中蛋白表达的问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】枯草中表达外源基因，有蛋白，但是没有酶活，是什么原因？
已经有4人回复
- 【求助/交流】蛋白酶在大肠杆菌表达在牛奶平板上有透明圈，液体诱导却无酶活
已经有5人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌表达系统蛋白酶对目的蛋白的水解问题
已经有11人回复
zemin_fang
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 3643.4
- 红花: 4
- 帖子: 327
- 在线: 79.2小时
- 虫号: 465566
- 注册: 2007-11-22
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
2楼2010-07-15 20:09:47
lwiaanngg
铁杆木虫 (著名写手)
- 应助: 46 (小学生)
- 贵宾: 0.773
- 金币: 7403.2
- 散金: 24
- 红花: 12
- 帖子: 1211
- 在线: 110.3小时
- 虫号: 43541
- 注册: 2004-04-10
- 专业: 应用高分子化学与物理
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+5):谢谢分享 2010-07-16 11:01:00
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+5):谢谢分享 2010-07-16 11:01:00
|
第一，分析一下你表达蛋白的来源，原核还是真核。 第二，IPTG浓度有点高，适当降低点。降温就不必了，25度不算高了，如果你想试，16，或20度看看了。但有一种情况，有的酶在降温后表达量上去了，但酶活降低；但在37C可溶表达很少。最终条件你要试一试了。 第三，尽量不要尝试复性，有二硫键的话不容易做。你可以去看看Rosetta-gami中chaperone有哪些，是否有能折叠你目标蛋白的。如果没有，你可以采用的方法：1) 添加指定的chaperone，2）使用通用的chaperone，3）密码子优化一下（这个方法我只是听说过有可能） |
3楼2010-07-16 09:36:31
4楼2010-07-16 10:01:44
5楼2016-03-12 18:58:05
6楼2018-11-26 15:00:59
