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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】大肠杆菌表达，有蛋白无酶活，如何解决
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xinyaolu

木虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】大肠杆菌表达，有蛋白无酶活，如何解决 已有5人参与

各位大侠，最近在表达一个100KD左右的蛋白，含有两个二硫键，基因中有稀有密码子，使用了pET32a作为载体，同时用Rosetta-gami作为宿主。25℃诱导，IPTG0.8mM.蛋白电泳有非常明显的条带，但是胞内可溶部分未能测到酶活，同时电泳现实胞内可溶部分也有蛋白条带。请问各位高手，如何优化才能实现蛋白的正确折叠，测到酶活，非常感谢
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1楼 2010-07-15 20:02:22
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jqq1985

银虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
看天(金币+1):谢谢交流 2010-07-16 11:01:27
大肠杆菌里面算是还原环境，二硫键应该不容易形成。所以我猜想是蛋白质不能正确折叠的原因吧。可以放到原始菌里面试一下吗？
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4楼2010-07-16 10:01:44
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