应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » GST融合蛋白纯化求助 ！！！
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
202/2返回列表上一页12
查看: 3420  |  回复: 19
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

漓江魂

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by deblway at 2011-05-31 18:03:01:
实际上Lysis buffer的用处主要是防止非目的蛋白的非特异性结合用的，例如在HIS TAG亲和层析过程中的Lysis Buffer中是含有少量的咪唑浓度的，而Elution buffer
中咪唑浓度会高些！我们才用Lysis buffer进行菌体的 ...

在 HIS 纯化中不一样呀    DTT可以将镍珠  氧化先变黄 在变黑  巯基乙醇就不会
赞一下 回复此楼
11楼2011-06-01 00:59:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

漓江魂

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

那个  Elution buffer 中的还原型 谷胱甘肽 很容易被氧化  所以 要临用临配  要用新鲜的
赞一下 回复此楼
12楼2011-06-01 01:01:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gppwfh

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

你的loading buffer不适用于纯化GST.我们这里都是用PBS作为上样缓冲液的。你的情况，基本上可以断定，目的蛋白没有挂柱，所以应该从结合液方面考虑
赞一下 回复此楼
13楼2011-06-01 11:05:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

alfred023

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
14楼2011-06-02 13:36:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gppwfh

金虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by alfred023 at 2011-06-02 13:36:30:
·结合液不就是PBS吗？？能不能指点一下结合液的配方？？

就是pbs,ph7.3
回复此楼
15楼2011-06-02 18:42:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

spark_online

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

一般情况多少都会有一些binding, 如果用SDS-PAGE gel 直接跑loading蛋白之后的beads，看不到beads上有蛋白，而且 loading buffer和lysis buffer都没有问题，GSH beads也没有问题，强烈怀疑是GST tag的问题，GST 的表达是否正确，plasmid有木有问题，正确表达的GST tag可以用anti GST antibody看一下
赞一下 回复此楼
16楼2011-06-04 12:26:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunqi88315

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

蛋白与树脂结合的时间稍长些。2h以上，放在摇床里面摇
赞一下 回复此楼
17楼2011-07-11 18:44:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

可以明确的告诉你，填料没有问题 ，蛋白肯定是流传了，至于什么问题，和你同学做个好好的比较吧
赞一下 回复此楼
18楼2011-07-12 14:48:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Champanzee

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by deblway at 2011-05-31 14:45:12
建议检查下所用的Lysis buffer，如果标签和填料没有问题的话,很有可能是lysis buffer使得融合蛋白不与GSH结合。。。。附上配方。。
        Lysis buffer （50ml）
1)         2.5ml 1 M Tris，pH8.0
2)         ...

可以再加问一下吗？有了裂解液，洗脱液，可以再附上Binding buffer吗
赞一下 回复此楼
没有做不到只有想不到
19楼2016-02-29 10:15:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

raoguibo

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
20楼2016-03-28 13:14:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 alfred023 的主题更新
202/2返回列表上一页12
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 086000生物与医药求调剂 +3 老天眷顾之人 2026-03-31 3/150 2026-04-05 22:24 by syh9288
[考研] 377求调剂 +6 by.ovo 2026-04-05 6/300 2026-04-05 22:18 by dongzh2009
[考研] 求调剂 +6 chenxrlkx 2026-04-05 6/300 2026-04-05 22:05 by imissbao
[考研] 一志愿生物与医药，296分，求调剂 +9 66鹿 2026-04-03 10/500 2026-04-05 20:11 by lys0704
[考研] 数一英一 347 人工智能国奖论文都有求调剂 +3 乌拉儿山脉 2026-03-30 7/350 2026-04-05 10:32 by zhq0425
[考研] 290求调剂085701 +10 1314捧花 2026-04-02 10/500 2026-04-05 10:19 by Sealedwind
[考研] 男生，一志愿沪9生物学071000，初试308求调剂 +3 刘墨墨 2026-04-04 3/150 2026-04-05 08:26 by barlinike
[考研] 292分，材料与化工，申请调剂 +22 程晴之 2026-04-01 26/1300 2026-04-04 22:03 by hemengdong
[考研] 求调剂 +6 朔朔话 2026-04-02 7/350 2026-04-04 19:16 by 蓝云思雨
[考研] 考研调剂 +4 zybz冲冲冲 2026-04-03 6/300 2026-04-04 13:08 by zybz冲冲冲
[考研] 338求调剂 +7 晟功? 2026-04-03 7/350 2026-04-03 16:46 by wxiongid
[考研] 求调剂 +9 akdhjs 2026-03-31 11/550 2026-04-03 13:32 by akdhjs
[考研] 建环，能源，土木老师路过看一看！！！ +5 嘿嘿uu 2026-04-01 5/250 2026-04-03 11:47 by znian
[考研] 生物学硕341求调剂 +4 你笑起来像云朵 2026-04-03 4/200 2026-04-03 10:32 by macy2011
[考研] 311求调剂一志愿合肥工业大学 +15 秋二十二 2026-03-30 15/750 2026-04-03 10:19 by linyelide
[考研] 260求调剂 +3 朱芷琳 2026-04-02 3/150 2026-04-03 08:44 by yulian1987
[考研] 一志愿陕西师范大学生物学317分 +5 1563日。 2026-04-02 5/250 2026-04-03 06:58 by ilovexiaobin
[考研] 交通运输考试264分求工科调剂 +4 jike777 2026-04-02 4/200 2026-04-02 21:53 by zllcz
[考研] 282求调剂 +13 呼吸都是减肥 2026-04-01 13/650 2026-04-02 14:10 by baoball
[考研] 304求调剂 +12 素年祭语 2026-03-31 15/750 2026-04-01 22:41 by peike
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭