【答案】应助回帖

11楼2011-06-01 00:59:14

漓江魂

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【答案】应助回帖

那个 Elution buffer 中的还原型谷胱甘肽很容易被氧化所以要临用临配要用新鲜的

12楼2011-06-01 01:01:49

gppwfh

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【答案】应助回帖

你的loading buffer不适用于纯化GST.我们这里都是用PBS作为上样缓冲液的。你的情况，基本上可以断定，目的蛋白没有挂柱，所以应该从结合液方面考虑

13楼2011-06-01 11:05:58

alfred023

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14楼2011-06-02 13:36:30

gppwfh

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引用回帖:

Originally posted by alfred023 at 2011-06-02 13:36:30:
·结合液不就是PBS吗？？能不能指点一下结合液的配方？？

就是pbs,ph7.3

15楼2011-06-02 18:42:16

spark_online

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【答案】应助回帖

一般情况多少都会有一些binding, 如果用SDS-PAGE gel 直接跑loading蛋白之后的beads，看不到beads上有蛋白，而且 loading buffer和lysis buffer都没有问题，GSH beads也没有问题，强烈怀疑是GST tag的问题，GST 的表达是否正确，plasmid有木有问题，正确表达的GST tag可以用anti GST antibody看一下

16楼2011-06-04 12:26:49

sunqi88315

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【答案】应助回帖

蛋白与树脂结合的时间稍长些。2h以上，放在摇床里面摇

17楼2011-07-11 18:44:01

lihuan0525

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【答案】应助回帖

可以明确的告诉你，填料没有问题，蛋白肯定是流传了，至于什么问题，和你同学做个好好的比较吧

18楼2011-07-12 14:48:51

Champanzee

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引用回帖:

6楼: Originally posted by deblway at 2011-05-31 14:45:12
建议检查下所用的Lysis buffer，如果标签和填料没有问题的话,很有可能是lysis buffer使得融合蛋白不与GSH结合。。。。附上配方。。
      Lysis buffer （50ml）
1)       2.5ml 1 M Tris，pH8.0
2)       ...

可以再加问一下吗？有了裂解液，洗脱液，可以再附上Binding buffer吗

没有做不到只有想不到

19楼2016-02-29 10:15:02

raoguibo

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20楼2016-03-28 13:14:28