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jialemon

新虫 (初入文坛)

[交流] 毕赤表达一酶基因,跑蛋白电泳只有一条带,是不是不用纯化了呀 已有6人参与

各位大侠,我用毕赤GS115表达一酶基因,跑SDS-PAGE,只有一条带,但是带比较粗,有点儿弥散,这样能不能说明蛋白是单一的,可以不做纯化了吗?可以直接做后面的酶学性质吗
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jialemon

新虫 (初入文坛)

希望懂的人能够指教一下,谢谢侬了
2楼2012-08-08 21:42:46
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awvc

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 很有道理 2012-08-09 14:13:45
理论上GS115的胞外分泌蛋白,(还要考虑你用哪种载体转入的),仅有你转入质粒中带有信号肽的那段异源蛋白,电泳检测的一条带仅能表明某一产物的相对含量高,是否有少量的其他杂质还需纯化,这样更严谨些。可能会含的有培养基中原有的氮源,死亡菌体降解后形成的杂质,蛋白质翻译中产生错误导致的不完整片段及翻译后加工错误(如信号肽切割,糖基化等),严谨期间建议纯化后在开展下一步,如果产物性质出现非预期结果也便于推究原因,仅为个人建议,供参考,如不妥请指正。
凡事感恩,恒久忍耐
3楼2012-08-09 09:25:25
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jialemon

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
3楼: Originally posted by awvc at 2012-08-09 09:25:25
理论上GS115的胞外分泌蛋白,(还要考虑你用哪种载体转入的),仅有你转入质粒中带有信号肽的那段异源蛋白,电泳检测的一条带仅能表明某一产物的相对含量高,是否有少量的其他杂质还需纯化,这样更严谨些。可能会含 ...

谢谢你啊,我就是担心不纯,所以一直没有往后面做酶学性质,按你说的要分离纯化一下,但是怎么纯化啊?分子筛应该没有用吧,因为现在的蛋白电泳只有一条带,就算我按常规方法分离纯化了,我怎么检测我纯化后是不是没有杂蛋白了?问题有点儿多,还望能够指教了,谢谢咯~~
4楼2012-08-09 20:29:36
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awvc

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-24 13:49:42
非常抱歉我没做蛋白纯化方面的实验 也没经验
给你推荐一篇比较详尽可靠的参考文献,也许有帮助
1.李春明,彭远义,2株黑曲霉植酸酶的分离纯化及其酶学性质研究
《西南农业大学学报(自然科学版)》- 2006年4期
2.李春明 , 彭远义 重组酵母E22植酸酶的分离纯化及酶学性质研究西南大学学报(自然科学版)第3O卷第11期Vo1.30 NO.11

以下是您的咨询结果 重组酵母E22植酸酶的分离纯化及酶学性质研究
附下载地址:http://www.textsharefiledownload ... 802320516736250.pdf

该咨询的有效期为10天。
希望有所帮助 祝顺利!
凡事感恩,恒久忍耐
5楼2012-08-10 21:59:35
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jialemon

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by awvc at 2012-08-10 21:59:35
非常抱歉我没做蛋白纯化方面的实验 也没经验
给你推荐一篇比较详尽可靠的参考文献,也许有帮助
1.李春明,彭远义,2株黑曲霉植酸酶的分离纯化及其酶学性质研究
《西南农业大学学报(自然科学版)》- 2006年4期  ...

非常感谢你!
6楼2012-08-11 14:37:37
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bioleo

金虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-24 13:49:53
做个简单定性的酶学实验,设个对照,不纯化也可以的。
这里纠正LZ一个观念,蛋白纯化目的不仅仅是获得单一蛋白,还包括核酸,小分子物质,盐,内毒素等。
如果楼主担心弥散中有杂带,可以减少蛋白上样量,提高分离胶浓度,电泳后用银染观察。
7楼2012-08-24 10:01:37
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8楼2012-09-19 22:26:08
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
个人觉得可能会有一定程度的糖基化导致条带并不是很均一,目前我做的蛋白除了这点问题不知道怎么处理才好
一花一世界、一叶一菩提
9楼2013-04-20 23:07:42
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
电泳只有一条带只是电泳纯而已,不能说明这一条带就是一种蛋白质,还应该做溶解度曲线,蛋白质的活性分析,红外光谱分析,有条件做过MS。
10楼2013-04-21 12:21:44
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