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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 毕赤表达一酶基因，跑蛋白电泳只有一条带，是不是不用纯化了呀
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jialemon

新虫 (初入文坛)

[交流] 毕赤表达一酶基因，跑蛋白电泳只有一条带，是不是不用纯化了呀 已有6人参与

各位大侠，我用毕赤GS115表达一酶基因，跑SDS-PAGE，只有一条带，但是带比较粗，有点儿弥散，这样能不能说明蛋白是单一的，可以不做纯化了吗？可以直接做后面的酶学性质吗
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1楼 2012-08-07 19:13:49
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jialemon

新虫 (初入文坛)
希望懂的人能够指教一下，谢谢侬了
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2楼2012-08-08 21:42:46
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awvc

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+3, 很有道理 2012-08-09 14:13:45
理论上GS115的胞外分泌蛋白，（还要考虑你用哪种载体转入的），仅有你转入质粒中带有信号肽的那段异源蛋白，电泳检测的一条带仅能表明某一产物的相对含量高，是否有少量的其他杂质还需纯化，这样更严谨些。可能会含的有培养基中原有的氮源，死亡菌体降解后形成的杂质，蛋白质翻译中产生错误导致的不完整片段及翻译后加工错误（如信号肽切割，糖基化等），严谨期间建议纯化后在开展下一步，如果产物性质出现非预期结果也便于推究原因，仅为个人建议，供参考，如不妥请指正。
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凡事感恩，恒久忍耐
3楼2012-08-09 09:25:25
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jialemon

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by awvc at 2012-08-09 09:25:25
理论上GS115的胞外分泌蛋白，（还要考虑你用哪种载体转入的），仅有你转入质粒中带有信号肽的那段异源蛋白，电泳检测的一条带仅能表明某一产物的相对含量高，是否有少量的其他杂质还需纯化，这样更严谨些。可能会含 ...

谢谢你啊，我就是担心不纯，所以一直没有往后面做酶学性质，按你说的要分离纯化一下，但是怎么纯化啊？分子筛应该没有用吧，因为现在的蛋白电泳只有一条带，就算我按常规方法分离纯化了，我怎么检测我纯化后是不是没有杂蛋白了？问题有点儿多，还望能够指教了，谢谢咯~~
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4楼2012-08-09 20:29:36
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awvc

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-24 13:49:42
非常抱歉我没做蛋白纯化方面的实验 也没经验
给你推荐一篇比较详尽可靠的参考文献，也许有帮助
1.李春明，彭远义，2株黑曲霉植酸酶的分离纯化及其酶学性质研究
《西南农业大学学报（自然科学版）》- 2006年4期
2.李春明 ， 彭远义 重组酵母E22植酸酶的分离纯化及酶学性质研究西南大学学报(自然科学版)第3O卷第11期Vo1．30 NO．11

以下是您的咨询结果 重组酵母E22植酸酶的分离纯化及酶学性质研究
附下载地址：http://www.textsharefiledownload ... 802320516736250.pdf

该咨询的有效期为10天。
希望有所帮助 祝顺利！
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凡事感恩，恒久忍耐
5楼2012-08-10 21:59:35
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jialemon

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by awvc at 2012-08-10 21:59:35
非常抱歉我没做蛋白纯化方面的实验 也没经验
给你推荐一篇比较详尽可靠的参考文献，也许有帮助
1.李春明，彭远义，2株黑曲霉植酸酶的分离纯化及其酶学性质研究
《西南农业大学学报（自然科学版）》- 2006年4期  ...

非常感谢你！
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6楼2012-08-11 14:37:37
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bioleo

金虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
小丹木木: 金币+2, 鼓励交流 2012-08-24 13:49:53
做个简单定性的酶学实验，设个对照，不纯化也可以的。
这里纠正LZ一个观念，蛋白纯化目的不仅仅是获得单一蛋白，还包括核酸，小分子物质，盐，内毒素等。
如果楼主担心弥散中有杂带，可以减少蛋白上样量，提高分离胶浓度，电泳后用银染观察。
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7楼2012-08-24 10:01:37
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yangaijie
8楼2012-09-19 22:26:08
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乐乐3952

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
个人觉得可能会有一定程度的糖基化导致条带并不是很均一，目前我做的蛋白除了这点问题不知道怎么处理才好
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一花一世界、一叶一菩提
9楼2013-04-20 23:07:42
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凌波丽

专家顾问 (知名作家)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
电泳只有一条带只是电泳纯而已，不能说明这一条带就是一种蛋白质，还应该做溶解度曲线，蛋白质的活性分析，红外光谱分析，有条件做过MS。
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10楼2013-04-21 12:21:44
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