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【求助/交流】酵母表达可溶性蛋白问题
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sunyi_lab
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[交流]
【求助/交流】酵母表达可溶性蛋白问题
第一次发帖,如有错误,大家多多批评哈
本人用酿酒酵母想表达一个转到PYES2里的目的基因,想表达出可溶蛋白,用聚丙烯酰胺凝胶电泳来看的结果,做了好多次都似有似无,求解决方法?还是因为酵母表达出来的蛋白量很小不易观察呢?
刚开始做实验,好多不懂,希望大虾赐教!
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2011-03-26 18:47:17
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sunyi_lab
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引用回帖:
Originally posted by
yunzhongfan
at 2011-05-03 21:21:46:
可以做RT-PCR先看看目的基因是否表达
小妹刚开始做,不太懂,我的目的基因在质粒载体上,为什么要做反转录呢?大侠啥意思?具体怎样做?谢谢交流
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9楼
2011-05-05 10:18:50
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西瓜
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sunyi_lab(金币+1): 呵呵,谢谢,先去照一下 2011-03-27 08:21:05
楼主啊,“似有似无”的情况,能不能贴个电泳图片来看看?这样大家更容易帮你哦
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3楼
2011-03-26 22:35:56
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sunyi_lab
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附上电泳图
实验是以未诱导的菌破碎蛋白作为空白对照,本人需要的蛋白应该在红色marker和下面的蓝色条带中间出现,可不知为什么感觉空白对照比诱导的还多了一条带,好奇怪。请各位大侠多多指教
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4楼
2011-03-27 18:10:28
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susizheng
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sunyi_lab(金币+5): 呵呵,谢谢啦 2011-03-30 07:26:10
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2011-05-05 17:35:22
酿酒酵母这个表达系统用的是组成型启动子,表达量一般情况下都不会很高,建议有tag的话,纯化或者做个western看看。
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5楼
2011-03-28 22:53:27
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