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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 可溶性蛋白含量测定
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殷灿灿

新虫 (小有名气)

[交流] 可溶性蛋白含量测定

为什么我在用考马斯亮蓝比色法测可溶性蛋白含量做标准曲线时，按照标准方法加的试剂，颜色反应却不明显，试剂没有问题，请各位赐教了
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1楼2012-03-22 14:51:43
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

ningda47

金虫 (小有名气)
★
殷灿灿(金币+2): 谢谢参与
引用回帖:
4楼: Originally posted by 殷灿灿 at 2012-03-22 15:44:23:
方法完全是你说的那样，但就是吸光度值特低，而且不同浓度处理吸光度没什么变化，真是搞不懂

这个牛血清白蛋白用的是那种的啊，牛血清白蛋白（全组分）和牛血清白蛋白V，哪一种啊
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8楼2012-04-24 09:42:06
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迷糊的orange

银虫 (小有名气)
★
殷灿灿(金币+2): 谢谢参与
有可能是你测的物质中蛋白含量太低了
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2楼2012-03-22 14:58:20
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liuzhaoxia

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
殷灿灿(金币+2): 谢谢参与
树树8013: 金币+2, 谢谢细心回答。 2012-04-25 18:43:30
你的标准溶液浓度是按方法中一样的吗？
采用考马斯亮蓝G-250染色法：
标准曲线的制作：取6支具塞试管，编号，并加入100μg/mL牛血清白蛋白标准溶液溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，用蒸馏水补至1.0mL，混匀后，向各试管中加入5.0mL考马斯亮蓝G-250溶液，立即充分混合，静置2min后，以0管为空白对照，在波长595nm处测定吸光度值。以蛋白质质量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，求得线性回归方程。
100μg/mL牛血清白蛋白标准溶液的配制：称取25mg牛血清白蛋白，加入蒸馏水溶解并定容至100mL。吸取上述溶液40mL，用蒸馏水稀释至100mL即可。
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殷灿灿
3楼2012-03-22 15:38:49
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殷灿灿

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by liuzhaoxia at 2012-03-22 15:38:49:
你的标准溶液浓度是按方法中一样的吗？
采用考马斯亮蓝G-250染色法：
标准曲线的制作：取6支具塞试管，编号，并加入100μg/mL牛血清白蛋白标准溶液溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，用蒸馏水补至1.0mL，混匀后 ...

方法完全是你说的那样，但就是吸光度值特低，而且不同浓度处理吸光度没什么变化，真是搞不懂
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4楼2012-03-22 15:44:23
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wangpei1991

金虫 (正式写手)
★
殷灿灿(金币+2): 谢谢参与
应该是蛋白浓度问题 还有就是分光光度计测的值应最好在0.2-0.8之间
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5楼2012-03-22 16:22:29
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kading

金虫 (正式写手)
★
殷灿灿(金币+2): 谢谢参与
只要是测出来结果对就行了啊，前面颜色什么的不重要啊，和很多因素有关的啊
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6楼2012-03-27 08:15:43
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qiaqia832

铜虫 (正式写手)
★ ★
殷灿灿(金币+2): 谢谢参与
树树8013: 金币+1, 谢谢提示，请继续关注食品板块。版主奖励。 2012-04-25 18:44:06
标准蛋白浓度是不是有问题，还有考马斯亮蓝溶液配制后最好放置一周，这样测得的标准曲线会好点儿
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9楼2012-04-24 09:58:10
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冯淼淼2011

新虫 (初入文坛)
★
殷灿灿(金币+2): 谢谢参与
您好，这个问题您解决了吗，我最近也遇到类似的问题了！
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10楼2014-04-22 09:48:43
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没入尘埃5

金虫 (小有名气)
★
殷灿灿(金币+2): 谢谢参与
引用回帖:
3楼: Originally posted by liuzhaoxia at 2012-03-22 15:38:49
你的标准溶液浓度是按方法中一样的吗？
采用考马斯亮蓝G-250染色法：
标准曲线的制作：取6支具塞试管，编号，并加入100μg/mL牛血清白蛋白标准溶液溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，用蒸馏水补至1.0mL，混匀后， ...

你好，我看到你测定可溶性蛋白的方法，有几个问题想要想你咨询一下：
1 配制考马斯亮蓝母液的时候，有的说要用无水乙醇，有的说要95%的乙醇，这两种乙醇配出来的考马斯亮蓝效果有区别吗？乙醇和磷酸的作用都是什么啊？
2 我看到有的资料里做标准曲线的溶液不是用蒸馏水补足1ml，是用Nacl补足的，这有什么区别吗？Nacl的作用是什么啊？
谢谢啦！
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11楼2014-06-27 08:20:53
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没入尘埃5

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by qiaqia832 at 2012-04-24 09:58:10
标准蛋白浓度是不是有问题，还有考马斯亮蓝溶液配制后最好放置一周，这样测得的标准曲线会好点儿

你好，请问考马斯亮蓝溶液放置一周是指的考马斯亮蓝母液放置一周吗？考马斯亮蓝溶液是用无水乙醇配置还是95%乙醇？有什么区别？
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12楼2014-06-27 08:22:07
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cz0919

新虫 (小有名气)
★
殷灿灿(金币+2): 谢谢参与
我的标曲竟然是负值，谁知道什么情况？样品0.2多正常
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13楼2015-11-26 21:44:24
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小小558

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
8楼: Originally posted by ningda47 at 2012-04-24 09:42:06
这个牛血清白蛋白用的是那种的啊，牛血清白蛋白（全组分）和牛血清白蛋白V，哪一种啊...

不同的血清蛋白会影响结果吗
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14楼2017-11-23 16:24:48
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yqfjp0237楼
2012-03-27 08:19   回复  
殷灿灿(金币+2): 谢谢参与
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