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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 专业学科区 » 食品 » 粮油与蛋白 » 可溶性蛋白含量测定
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殷灿灿

新虫 (小有名气)

[交流] 可溶性蛋白含量测定

为什么我在用考马斯亮蓝比色法测可溶性蛋白含量做标准曲线时，按照标准方法加的试剂，颜色反应却不明显，试剂没有问题，请各位赐教了
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1楼 2012-03-22 14:51:43
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没入尘埃5

金虫 (小有名气)
★
殷灿灿(金币+2): 谢谢参与
引用回帖:
3楼: Originally posted by liuzhaoxia at 2012-03-22 15:38:49
你的标准溶液浓度是按方法中一样的吗？
采用考马斯亮蓝G-250染色法：
标准曲线的制作：取6支具塞试管，编号，并加入100μg/mL牛血清白蛋白标准溶液溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，用蒸馏水补至1.0mL，混匀后， ...

你好，我看到你测定可溶性蛋白的方法，有几个问题想要想你咨询一下：
1 配制考马斯亮蓝母液的时候，有的说要用无水乙醇，有的说要95%的乙醇，这两种乙醇配出来的考马斯亮蓝效果有区别吗？乙醇和磷酸的作用都是什么啊？
2 我看到有的资料里做标准曲线的溶液不是用蒸馏水补足1ml，是用Nacl补足的，这有什么区别吗？Nacl的作用是什么啊？
谢谢啦！
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11楼2014-06-27 08:20:53
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迷糊的orange

银虫 (小有名气)
★
殷灿灿(金币+2): 谢谢参与
有可能是你测的物质中蛋白含量太低了
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2楼2012-03-22 14:58:20
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liuzhaoxia

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
殷灿灿(金币+2): 谢谢参与
树树8013: 金币+2, 谢谢细心回答。 2012-04-25 18:43:30
你的标准溶液浓度是按方法中一样的吗？
采用考马斯亮蓝G-250染色法：
标准曲线的制作：取6支具塞试管，编号，并加入100μg/mL牛血清白蛋白标准溶液溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，用蒸馏水补至1.0mL，混匀后，向各试管中加入5.0mL考马斯亮蓝G-250溶液，立即充分混合，静置2min后，以0管为空白对照，在波长595nm处测定吸光度值。以蛋白质质量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线，求得线性回归方程。
100μg/mL牛血清白蛋白标准溶液的配制：称取25mg牛血清白蛋白，加入蒸馏水溶解并定容至100mL。吸取上述溶液40mL，用蒸馏水稀释至100mL即可。
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殷灿灿
3楼2012-03-22 15:38:49
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殷灿灿

新虫 (小有名气)
送鲜花一朵
引用回帖:
3楼: Originally posted by liuzhaoxia at 2012-03-22 15:38:49:
你的标准溶液浓度是按方法中一样的吗？
采用考马斯亮蓝G-250染色法：
标准曲线的制作：取6支具塞试管，编号，并加入100μg/mL牛血清白蛋白标准溶液溶液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL，用蒸馏水补至1.0mL，混匀后 ...

方法完全是你说的那样，但就是吸光度值特低，而且不同浓度处理吸光度没什么变化，真是搞不懂
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4楼2012-03-22 15:44:23
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