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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】蛋白质含量测定问题
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wissl52100

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】蛋白质含量测定问题

各位生物界的达人，请教个问题，我是材料学专业的，但是我的课题涉及到样品蛋白质含量的测定，我也查了一些资料，有很多方法，比如紫外分光光度法，开始要绘制标准曲线，我想问的是，大多数用的是牛血清蛋白做标准样品，而我的样品中蛋白质类型不一样，能否参照标准曲线。还有既然是标准曲线我是不是不用自己绘制，直接参照别人的，因为标准样品都是一样的啊，但是我在网上查的很多标准曲线相差很大，都不一样啊，请各位指导下？可能问的问题大家觉得可笑，但还是想听下大家的意见！谢谢~~~~
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1楼 2011-01-17 20:12:14
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落满夏天

银虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
小丹木木(金币+3): 鼓励交流 2012-02-13 17:57:15
我们用的是lowry法,你的线性梯度可以这么设置,牛血清蛋白稀释到0.1mg每毫升,精确稀释,然后梯度是,0ul,200ul,400ul,600ul,800ul,1000ul,统一用水补到1ml.样品的话稀释到浓度50ug每毫升.
但是这个方法影响因素多,得研究下你的缓冲体系有没有影响物质,一般有氧化还原的东西都不行,BCA原理也是氧化还原,考染的话我很少做,但是个人觉得这方法误差可能大些.另外关键的一点是你所测的蛋白结构不能与牛血清蛋白差太多,差太多就没有意义了.紫外扫描的话是苯环状氨基酸吸收,纯度好的话可以用,建议你两种方法对比研究.
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18楼2012-02-13 17:24:02
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wissl52100

铜虫 (小有名气)
还有个问题，就是做紫外的时候，好像样品的蛋白质浓度有范围规定，在0.1~1mg/ml之间，但是我的样品我也不知道蛋白质的浓度在什么范围内，那该怎么办啊？
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2楼2011-01-17 20:16:38
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wuw579

铁杆木虫 (正式写手)
★
rainwander(金币+1): 鼓励积极参与交流~~~ 2011-01-17 22:53:31
wissl52100(金币+2): 2011-01-18 10:41:48
标准曲线还是要自己做，不同人不同仪器不同操作方法得出来的结果都不一样。
选择标准蛋白也要因试验而异。
可以多做几个梯度。
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3楼2011-01-17 20:25:13
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wissl52100

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by wuw579 at 2011-01-17 20:25:13:
标准曲线还是要自己做，不同人不同仪器不同操作方法得出来的结果都不一样。
选择标准蛋白也要因试验而异。
可以多做几个梯度。

什么叫多做几个梯度？我看一些资料中写到蛋白质含量可以直接算出：c=1.45A280-0.74A260     这是不是说可以不用做标准曲线了，我的课题在蛋白质含量测量不用特别精确，直接按上式算可取吗？
还我我2楼提到的这个问题，样品蛋白质含量范围无法确定，该怎么办？

还请赐教！谢谢~
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4楼2011-01-17 21:48:37
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