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cindererra

银虫 (初入文坛)

[交流] 【求助/交流】关于蛋白浓度测定 已有4人参与

请教各位,我用考马斯亮蓝法测蛋白浓度,为什么测出来的会比理论值低100倍呢?而且目的蛋白稀释不同的倍数,测出来的值也相差非常大,通常是几十倍的差别,不管是用试剂盒还是自己配制的考马斯亮蓝溶液都一样。不知道是不是蛋白的溶剂的问题呢,我的蛋白一个是从大孔吸附柱洗脱下来的,含有异丙醇和乙酸;另一个是阴离子交换洗脱液,含有哌嗪和NaCl。有哪位遇到过这种问题,或是研究过,能不能帮我分析一下?谢谢
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王会征

铁杆木虫 (著名写手)

醇类肯定有影响啊,建议先用脱盐柱脱盐处理啊。
4楼2010-10-10 20:43:30
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)

我爱打老虎

文献杰出贡献

★ ★
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amisking(金币+1):good! 2010-10-10 17:26:13
有些溶剂会影响到蛋白浓度测定的,pH亦有一定影响。所以最好能将这些有机试剂通过透析去除掉然后再测。
The world is a fine place and worth fighting for. I agree with the second part.
2楼2010-10-10 16:44:44
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幽蓝王子

新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★
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amisking(金币+3): 2010-10-10 17:26:17
你把样品煮沸的时候打开盖子煮,有机溶剂可以挥发出去,盐离子可以透析,这个只能大概看,而且有经验的人才能看出来多少浓度。你最好用其他方法,你蛋白纯不?纯的话可以用lowry法测,精度很高,试剂也很简单。只有五种。
我是你转身就忘记的路人甲凭什么让我陪你蹉跎到天涯
3楼2010-10-10 17:03:57
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
这种问题请搜索旧帖,已解决,不用浪费时间等回帖。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
5楼2010-10-10 20:46:10
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