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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳/WB » 蛋白浓度过低，无法做WB,如何进行蛋白浓缩？
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xylem

金虫 (小有名气)

[求助] 蛋白浓度过低，无法做WB,如何进行蛋白浓缩？

急着做完WB毕业,但提取蛋白的浓度太低，重新采样提蛋白已经不大可能，求高手指点蛋白经济，可靠的蛋白浓缩方法，最好附上具体的步骤。谢谢

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1楼 2012-09-12 23:06:00
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

xl0071334

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

蛋白存放在裂解液里也很容易降解的

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8楼2012-09-13 19:55:06
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jl860822

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
以前我用透析袋做过浓缩，但是你的样品估计不行，因为样品量较少，但是你可以用超滤管试试
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9楼2012-09-14 08:45:25
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aixia5

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
xylem: 金币+2, ★★★很有帮助 2012-09-15 00:40:08
引用回帖:
5楼: Originally posted by xylem at 2012-09-13 12:26:10
30kd.但这样会不会对蛋白损失过大啊，样品本来就不多。现在保存在裂解液中。
...

那你用3KD的或者10KD的，你的目标蛋白不损失就可以了。浓缩效果挺好的。一般用三种，一个是0.5ml浓缩到20ul，4ml浓缩到60ul，15ml浓缩到250ul.
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10楼2012-09-14 09:03:06
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_然然

金虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by xylem at 2012-09-13 19:09:31
蛋白存放在裂解夜中，这样能做吗？...

我们之前 是电洗脱方法纯化蛋白 蛋白融在溶液中  外加peg干燥 不知你的情况 可以试一下
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11楼2012-09-14 14:29:26
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sswisdomss

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
是蛋白浓度低，量还大吧？
最好的方法就是超滤浓缩
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12楼2012-09-14 15:31:13
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panyuzhu

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
16楼2013-04-26 20:17:51
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普通回帖

xl0071334

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
硫酸铵沉淀、冻干或者是密理博的超滤管浓缩
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2楼2012-09-13 09:36:35
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aixia5

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
买一个millipore的超滤管就可以了，一个100左右，离心就可以了。你要的蛋白是多少KD的？
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3楼2012-09-13 10:20:43
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_然然

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
放在透析袋里 peg6000透析
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4楼2012-09-13 10:27:56
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xylem

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by aixia5 at 2012-09-13 10:20:43
买一个millipore的超滤管就可以了，一个100左右，离心就可以了。你要的蛋白是多少KD的？

30kd.但这样会不会对蛋白损失过大啊，样品本来就不多。现在保存在裂解液中。

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5楼2012-09-13 12:26:10
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xylem

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xl0071334 at 2012-09-13 09:36:35
硫酸铵沉淀、冻干或者是密理博的超滤管浓缩

会不会导致样品损失过多呀

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6楼2012-09-13 12:27:33
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xylem

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by _然然 at 2012-09-13 10:27:56
放在透析袋里 peg6000透析

蛋白存放在裂解夜中，这样能做吗？
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7楼2012-09-13 19:09:31
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