应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » WB蛋白定量
81/1返回列表
查看: 3885  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看

水水726

新虫 (小有名气)

[交流] WB蛋白定量 已有3人参与

每次提完蛋白进行含量测定，bradford法，做WB时都发现内参不一致，然后从-70取出一部分蛋白重新测定，都能发现与第一次测的含量有偏差。。汗哪！难道现提的蛋白要先储存一天才能再测？？求高手指点！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

【分子生物】EPI帖 蛋白质生物学实验经验

» 猜你喜欢
1楼 2011-05-07 23:48:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

shenhaiwang

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-08 15:24:01
bradford法有其优点，但是去污剂、Triton-100、SDS和0.1MNaOH等干扰物质都会对其检测结果产生影响。如果要求比较严格的话，加入试剂后的5——20min内颜色是最稳定的，最好在这段时间内测定吸光值。另外，不知道楼主所用的紫外分光光度计是什么样子的，有些仪器本身误差就比较大，前后测量的结果都有可能有较大的差别，建议用其他比较准确的仪器再试一下。最后，如果楼主实验操作规范，仪器没有问题的话，那很有可能是样品的问题，可能是样品蛋白不稳定，经过冻融以后，出现溶解度下降等情况；这样的话，在测定之前，应该充分震荡一下，在进行测定。一点愚见，希望对楼主有所帮助！
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-05-08 13:29:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

水水726

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by shenhaiwang at 2011-05-08 13:29:57:
bradford法有其优点，但是去污剂、Triton-100、SDS和0.1MNaOH等干扰物质都会对其检测结果产生影响。如果要求比较严格的话，加入试剂后的5——20min内颜色是最稳定的，最好在这段时间内测定吸光值。另外，不知道楼 ...

用酶标仪测的，并无这些干扰剂，发现内参不齐后，再去重测，一般间隔一天吧，发现有的样品与前一天测的无变化，有的却变化很大，纠结，郁闷
赞一下 回复此楼
3楼2011-05-08 17:26:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

314300420

捐助贵宾 (著名写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
dhd997(金币+3): good 2011-05-09 08:00:50
可以试试BCA定量，试剂盒不贵，操作也很方便。
定量不稳定，是不是样品浓度过低，或者过高？样品浓度过低不稳定就很正常了，因为在那个范围内，误差对结果的影响很大。过高了，需要把样品稀释到标准曲线范围内测定才有效。楼主提取的是细胞样品？还是组织样品？定量后浓度范围是多少？
赞一下(2人) 回复此楼
4楼2011-05-08 22:36:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

水水726

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 314300420 at 2011-05-08 22:36:53:
可以试试BCA定量，试剂盒不贵，操作也很方便。
定量不稳定，是不是样品浓度过低，或者过高？样品浓度过低不稳定就很正常了，因为在那个范围内，误差对结果的影响很大。过高了，需要把样品稀释到标准曲线范围内测 ...

一般浓度是八至十几ug/ul吧，不会超过15吧。。。应该不低了吧。。。，同一批样品中总有几个有变动的，纠结啊。。。
赞一下 回复此楼
5楼2011-05-08 23:25:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
★ ★
西瓜(金币+2): Good！头像是本人？帅噢 2011-05-09 22:18:11
bca定量能好些     冻存后的蛋白可能也有降解    好的数据最好不要冻
赞一下(1人) 回复此楼
6楼2011-05-09 21:43:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

水水726

新虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by linyingjia at 2011-05-09 21:43:55:
bca定量能好些     冻存后的蛋白可能也有降解    好的数据最好不要冻

我都是提完立刻测蛋白含量的啊，然后做WB就发现内参不整齐,只能把冻存的蛋白拿出来再测一遍
赞一下 回复此楼
7楼2011-05-10 09:07:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

linyingjia

至尊木虫 (职业作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
Originally posted by 水水726 at 2011-05-10 09:07:39:
我都是提完立刻测蛋白含量的啊，然后做WB就发现内参不整齐,只能把冻存的蛋白拿出来再测一遍

哦   我们是bca定量的   r大概0.99以上
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-05-10 09:28:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 水水726 的主题更新
81/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 欢迎申博同学联系 +3 天道酬勤2026686 2026-03-10 7/350 2026-03-15 19:03 by 天道酬勤2026686
[考研] 309求调剂 +4 花与叶@ 2026-03-10 4/200 2026-03-14 21:26 by a不易
[考研] 304求调剂 +5 小熊joy 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:07 by peike
[考研] 中科大材料专硕319求调剂 +3 孟鑫材料 2026-03-13 3/150 2026-03-14 18:10 by houyaoxu
[考研] 085600求调剂 +3 a邵星池 2026-03-09 3/150 2026-03-14 01:32 by JourneyLucky
[考研] 考研材料与化工，求调剂 +8 戏精丹丹丹 2026-03-09 8/400 2026-03-14 01:14 by JourneyLucky
[考研] 265求调剂 +9 小木虫085600 2026-03-09 12/600 2026-03-14 01:11 by JourneyLucky
[考研] b区环境工程求调剂 +4 Maps1 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:23 by JourneyLucky
[考研] 311求调剂 +5 牛乳糖的卡卡 2026-03-10 5/250 2026-03-14 00:05 by JourneyLucky
[考研] 材料与化工求调剂一志愿 985 总分 295 +8 dream…… 2026-03-12 8/400 2026-03-13 22:17 by 星空星月
[考研] 0703化学一志愿211 总分320求调剂 +5 玛卡巴卡啊哈 2026-03-11 5/250 2026-03-13 21:40 by JourneyLucky
[考研] （081700）化学工程与技术-298分求调剂 +12 11啦啦啦 2026-03-11 35/1750 2026-03-13 21:25 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[考研] 求调剂 +7 18880831720 2026-03-11 7/350 2026-03-13 16:10 by JourneyLucky
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-12 10/500 2026-03-13 15:42 by ms629
[论文投稿] 投稿问题 5+4 星光灿烂xt 2026-03-12 6/300 2026-03-13 14:17 by god_tian
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +3 崔wj 2026-03-12 4/200 2026-03-12 19:33 by 求调剂zz
[考博] 读博申请 +5 感dd 2026-03-10 7/350 2026-03-11 17:02 by QGZDSYS
[考研] 0857环境调剂 +5 熠熠_11 2026-03-10 5/250 2026-03-11 10:59 by wang_dand
[考研] 一志愿：武汉理工，材料工程，英二数二 总分314 +3 2202020125 2026-03-10 4/200 2026-03-10 13:54 by xiongyaxuan
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭