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WB蛋白定量 已有3人参与
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| 每次提完蛋白进行含量测定，bradford法，做WB时都发现内参不一致，然后从-70取出一部分蛋白重新测定，都能发现与第一次测的含量有偏差。。汗哪！难道现提的蛋白要先储存一天才能再测？？求高手指点！ |
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 【分子生物】EPI帖 | 蛋白质生物学实验经验 |
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shenhaiwang
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dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-08 15:24:01
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dhd997(金币+5, EPI+1): good 2011-05-08 15:24:01
| bradford法有其优点，但是去污剂、Triton-100、SDS和0.1MNaOH等干扰物质都会对其检测结果产生影响。如果要求比较严格的话，加入试剂后的5——20min内颜色是最稳定的，最好在这段时间内测定吸光值。另外，不知道楼主所用的紫外分光光度计是什么样子的，有些仪器本身误差就比较大，前后测量的结果都有可能有较大的差别，建议用其他比较准确的仪器再试一下。最后，如果楼主实验操作规范，仪器没有问题的话，那很有可能是样品的问题，可能是样品蛋白不稳定，经过冻融以后，出现溶解度下降等情况；这样的话，在测定之前，应该充分震荡一下，在进行测定。一点愚见，希望对楼主有所帮助！ |
2楼2011-05-08 13:29:57
3楼2011-05-08 17:26:35
314300420
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4楼2011-05-08 22:36:53
5楼2011-05-08 23:25:33
linyingjia
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8楼2011-05-10 09:28:50